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nvonne 我在做靶基因预测时，有一个靶基因是NCR3（ ENST00000376069），但是我在NCBI中查找时，NCR3的几个mRNA形式都和这个号不同，怎么回事呢？请高手帮忙！非常感谢！forest22939 Do u use the microchip to predict the target gene? If in this case, ask the tech support , suppose it is an error.mrliuw ENST00000376069，这个ENST应该是ENSE ...

liufengxi 最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染，虽然转染细胞阳性率不低，但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少（转染剂量是一样的）。最初怀疑是细胞状态问题，重新复苏细胞后，没有改善；后将Hela细胞换为HepG 2细胞后，结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢，就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈！思路迪病毒 liufengxi wrote: ...

bin1986 最近在做凋亡，在用凯基的caspase-3分光光度法试剂盒检测细胞经过与药物孵育24小时后检测用酶标仪检测，OD值在0.1-0.3之间，有一定浓度依赖，高浓度下caspase-3的活化程度有差不多4问题在于，我用BCA蛋白定量得到的蛋白浓度时30多ug/ul，我加了有250ug，如果按照说明书的话，这个OD值应该在1左右，而我的最高才0.3.另外我的control孔（没加药）与我最低浓度的值差不多。问题 1. 我 ...

小嘴鱼 问了几家现在都不做MLPA，不知哪家公司现在还做MLPA探针和检测，费用大概多少biolinkphilic 我帮你咨询一下佰而林生物做不做吧tianjia19851985 多重连接探针扩增（MLPA）技术服务:厦门基科生物科技有限公司竭诚为您提供MLPA探针设计、高纯度MLPA探针合成等服务。厦门基科生物科技有限公司可以按照您的实验需求个性定制MLPA实验方案。为您建立自己的一套MLPA体系。可联系0592-2 ...

ez815 各位战友，请问gastrin怎么溶解？我买了想加在细胞培养液中，但不知道粉末怎么溶解？急呀！紧急求助！在此谢过！zhujoker http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=gastrin看看人家是怎么做的？kuailecaoyang 请问一下问问题的战友已经知道怎么溶解了吗，gastrin？我也想做，但是也不知道如何溶解。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

nvonne 我购买的miRNA mimic 带FAM标记，本打算用流式检测转染效率，但发现荧光信号很弱，转染后采用定量PCR检测miRNA的表达变化，相对定量分析，发现mimic组比NC阴性对照组的miRNA表达量提高了100多倍，这虽然表明转染mimic成功，但总感觉这么高的变化有点太离谱了是不是？也没查到相关文献，谁能给我一些参考？非常感谢zhujoker 顺转就是这么高，我的也是这样，有的能够上调1000倍nvonne ...

lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个 ...

米宝 这俩天做实验，极其郁闷。我做的总AKt和pAkt,大鼠脑组织，第一次跑总AKT的时候，我觉得可能是因为蛋白是提取的浓度比较好吧，出来了一条浓浓的条带，三组总AKt都出了，接下来做pAkt,就出了一个带，效果挺明显的。后来再做pAkt的时候，跑了4张膜，显影的时候，太干净了，上面什么都没有，甚至连个杂带，斑点 都没！实验是在实验员的领导下完成的，技术上基本没什么纰漏，查阅本版面有关这问题方面的介绍，有的解释说pakt降解了 ...

dj070886 从CST新买了一支U0126，是冻干粉，而且是用CST公司那种装抗体的管子装的，没有封口，请问这种状态下的粉子是有菌的还是无菌的？求助啊，求助chp_cn 应该是无菌的，你应该到culture hood中稀释好，分装到无菌的小管中保存。good luck!seagate 就算有菌，拿dmso溶解为母液就可以用了，dmso号称万能溶剂，本身就有强大的杀菌能力吕文明 既然提出来了这个抑制剂,我问一个问题:U0126 作为RAS ...

yesezhizhong 小弟购买的是SIGMA的3MA，50mg/瓶，拟配制工作液浓度1.5mg/ml, 不知道该3MA的母液该如何配制？用什么溶解？该如何保存？请高手指点！万分感谢！！chp_cn This product is soluble in DMF (10 mg/ml, may require gentle heating), yielding a clear, colorless solution. It is also soluble in water, 95% ethanol, or 1 N NaOH at 30 mg/ml with he ...

einsteininchina 军事医学科学院-微生物流行研究所-分析微生物实验室 招收联合培养研究生实验室：军事医学科学院-微生物流行研究所-分析微生物实验室，是“病原微生物生物安全国家重点实验室”的组成部分。地址：北京丰台东大街。招收形式：联合培养硕士或博士生，签署官方的联合培养协议；学生本人必须与母校导师事先协调好。要求专业背景：生物、医学、农业相关专业研究课题：课题在我们实验室做，做我们的课题。回原学校毕业。主要研究内 ...

hhx111 我在做转录因子的入核情况，可是从IFA结果来看，有部分入核，可是还有没有入核的，那么有什么方法可以计算入核的比例吗？在一篇文献中看到有用“散点分析软件”来分析比例的。求助高人指点？ronaldo_zj 个人觉得所谓的“散点分析软件”不是很靠谱，因为毕竟免疫荧光只能做到定性，用免疫荧光来定量是有争议的，现在很多杂志都不是很承认单一的免疫荧光来定量。我建议楼主可以这样：1. 分别提取总蛋白，核蛋白和细胞质蛋白来分析转 ...

2012hunanjob 在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~2012hunanjob 顶，有没有人 ...

2012hunanjob 在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~2012hunanjob 顶，有没有人 ...

miamian 请问哪位用ABI 7900做过等位基因分型？我们装的是SDS2.3软件，今天做等位基因分型，可是最后图谱那里没有图出来，结果无法判断，是不是设置错误了呢？我看的ABI 7900说明书，说明书上关于等位基因分型（AD）其中有一步是“create marker”，再“create detector”，可我设置完cmarker后，就软件上没有发现“ceate detector”，所以我没有另外设置detector，只是在PCR扩增 ...

dentist昭安 买的信号通路抑制剂（PDTC，LY294002，SB203580），用之前是不是一般都需要做个细胞活力检测的？如台盼蓝或MTT？做MTT的话，一般是设几个不同的浓度组，作用一定时间（24h?）后检测？是这样设计的吗？那不同的抑制剂浓度分组一般选择哪几个浓度呢？是按说明书规定的作用范围在其中选择几个组，还是参考文献？但这方面类似文献看到的好像不是很多，感觉别人一般都不做或者不把其作为结果放上去，所以也 ...

海晏清雨 我做了PD98059的MTT实验，细胞是间充质干细胞C3H10T1/2，可是结果很奇怪，居然是促增殖的，加药组明显比对照组OD值大，药物浓度是10uM，50uM，100uM，150uM，怎么会这样呢，请教各位！海晏清雨 PD98059处理细胞一般多久，48h可以吗，有人说几个小时就行了，48h的话药物已经失效了，可是我看了很多文献有处理48h的，但不清楚为什么会促增殖，求教各位了！chp_cn PD98059可以抑制M ...

xan36 本人刚用了提poly(A)尾RNA的盒子提了mRNA，扩了内参（b-actin），有条带，但不知道怎么样才能证明就是mRNA，求高手指点wlh0369 能不能跑一下PAGE胶，看看条带位置啊？xan36 谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳，但出来了三条带，跟totalRNA 的位置相似xan36 wlh0369 wrote:能不能跑一下PAGE胶，看看条带位置啊？谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶 ...

beebeeliang 大家好！最近我在做EMT 方面的研究，遇到一些问题，请大家给点意见。在TGFb诱导细胞EMT的试验中，有的文章是在无血清培养基中进行的，有的则是在10％FBS培养基中进行的。相信大家看文章都会发现这一点。不知两者有何利弊？请高手分析一下！万分感激。zfv2007 其实大多数TGFb诱导EMT实验中，所谓的无血清培养基都是包含0.5%FBS的培养基。严格的EMT要排除细胞增殖对实验的影响，往往需要细胞生 ...

dentist昭安 我刚买了几个信号通路的特异性抑制剂，分别是NF-кB(PDTC)、PI3K/Akt (LY294002）、 p38 MAPK (SB203580) ；看说明书，PDTC的分子量是164.29，PDTC可溶于水(1mg/ml)，在DMSO中的溶解度可达到100mM； LY294002 的分子量是307.3，1mg用DMSO配制，浓度为10mg/ml，共0.1ml ；SB203580 的分子量是377.43，1mg用DMSO配制，浓度为20mg/ ...