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magichunter 我在文献中查到，PPARr拮抗剂GW9662可以抑制药物的抗炎作用，前提是药物是通过激活PPARr来实现其抗炎作用的。即炎症细胞中的炎症因子（如：NO）升高，加入抗炎药物后，NO水平降低，当同时给予GW9662和该抗炎药物时，该药物的抗炎作用被抑制，NO水平再次升高。以上是文献的报道，但是我在实验时发现，加入了抗炎药物+GW9662后，NO的水平不但没有升高，反而降低了（与单独抗炎药物组相比），不 ...

zqm0815 新鲜全血离心去掉血浆后，剩下的血细胞可以保存起来以后用于提取DNA吗？如何保存，可以保存多长时间？谢谢！lide658 可以用于提取DNA，我们是放在-20保存的，放-80也可以，一般保存2-3年都可以提取基因组DNA。业精于勤荒于嬉 可以用来提取DNA，保存的时间可以是很长的，尤其是放到-80度冰箱中。也可以提取后保存，DNA降解很慢，比较容易保存。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

shewotwzqishui 大家好！请教一个问题：本人已经稳压了一个过表达的突变型细胞系，现在想在此基础上设计一段siRNA或shRNA，瞬时干扰或稳定沉默掉内源的，不知是否可行，设计这段序列、稳压的过程中需要注意哪些问题？谢谢。lixiaoling633 设计mRNA CDS前的区段吧bigbang_0_0 可以设计在CDS区，也可以设计在UTR区，前提是特异性良好，可使用相关的在线软件设计，前提是这个基因对于细胞的正常生 ...

阿兰梦 之前没有做过，只是根据文献的简单描述依葫芦画瓢，但是毕竟是好几千的试剂，生怕弄错了临床医生一下子做科研，确实很多地方不懂，很艰难目的是想用双荧光素酶报告基因的方法检测药物内皮细胞的NF-KB的转录活性影响，需要买pNF-kB-Luc 报告质粒，碧云天有；然后需要双荧光素酶报告基因检测系统，promega有；另外还需要一个内参，文献是β-半乳糖苷酶问题是：1、不知道买哪一个对：http://www.promega.com. ...

馃芝 求高人指点一些关于细胞凋亡的文献，最好是研究进展方面的，谢谢belovedf 细胞凋亡，好广的范围，最近我也在关注这方面，因为我的导师的方向之一也是细胞凋亡。问到我具体的研究方向就把我问倒了。昨天听了丁树哲教授有关运动适应的信号传导研究进展，其中有涉及一些细胞凋亡信号途径http://news.dxy.cn/bbs/topic/18108752?tpg=1&age=0抗凋亡诱导抗肿瘤请问您是体外培养细胞，研究细胞凋亡，还 ...

qingyu2010 打算挑战一下传说中的EMSA所以需要学习提取核蛋白了~不过因为还是菜鸟所以有个小问题。。。我想先做western检验一下核蛋白和胞质蛋白分离的好不好，该选择什么蛋白来检测呢？当然最好能是常用的或者以后也用的上抗体的蛋白啦~对于核蛋白，是不是用histone或者laminin或者大多数转录因子都可以？Thermo的网页上给的是OCT-1，某文献里是SP-1，我用c-Jun之类的OK么?_?对于胞质 ...

lilyfisher 黄嘌呤有可以有不同的2种分子式？谢谢。lx7051178 一看就是有机化学没学好。酮式和烯醇式互变异构听说过吗？@_@lilyfisher 感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

lilyfisher 半胱氨酸和同型半胱氨酸是不是同一个物质，或者说它们结构上有什么区别，谢谢slytjiaofei 当然不是同一个物质，可以参考人卫版生化中氨基酸代谢一章！！！lmnsmu 半胱氨酸与同型半胱氨酸不同，同型半胱氨酸 比半胱氨酸多一个CH2，同型半胱氨酸是甲硫氨酸脱去-SH上甲基后的产物。甲硫氨酸（蛋氨酸）在甲硫氨酸循环中首先活化生成S腺苷甲硫氨酸，提供甲基后转变成S腺苷同型半胱氨酸，然后脱腺苷生成同型半胱氨酸 ...

阿兰梦 看了文献测活性RhoA 有几种方法：1、经典的，是放射标记γ32-P-GTP 方法，因为放射性，现在不怎么用了。2、看到国内有文献，采用分离胞膜胞浆，然后用抗RhoA抗体做western。这是基于胞浆都是GDP-RhoA，胞膜是GTP-RhoA的原理，但是总觉得有什么不对的地方？为什么没有被广泛采用？3、现在多采用 pull down方法，RhoA-GTP与Rhotekin的RBD结合，最后用RhoA抗体检测沉淀物中RhoA-GT ...

陈蛋蛋1号 本人想从石蜡切片中提取RNA，希望有经验的高手指点下迷津呀！lmnsmu 石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。陈蛋蛋1号 lmnsmu wrote:石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。好的！谢谢~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、 ...

douermm 最近需要扩增质粒，RNAi用的。接大肠杆菌种用的LB培养基，看有的文章上写的配成PH=7.0的，有的写配成PH=7.5的，到底应该配成多少呢？还有，用买的比如麦康凯培养基，会不会比自己配的效果好？谢谢~！slytjiaofei ph7或7.5对大肠杆菌生长基本没有任何影响。douermm 谢谢楼上~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

liufengxi 我用PEI（sigma 25kDa）作为转染试剂，但是发现，同样的细胞，同样的N/P 条件下。转染效果一次比一次要差，难道是PEI容易在水性条件下降解？我们的这个PEI买的时间比较久了，不知道是不是该买新的了。一直找不出原因，很是郁闷，请大虾帮忙解答，dafang0212 PEI粉末放置久了后，是会出现转染效率变差的状况的。另外不知道你的PEI用做转染前有进行加热处理吗？PEI在4度或者-20中放置一段时间后会 ...

环佩从容 要做下一步实验啦，这两个抗体选哪个呀，目前研究有没有区分哪一个更好点啊ronaldo_zj 楼主您好。1. 楼主需要知道Pro caspase-3以及Cleaved caspase-3的功能以及检测手段，不是说哪个好那个不好的问题，而是根据你的课题需要检测何种片段的问题。请楼主先具体查阅关于caspase活化的文献后再定好实验计划；2. 目前多数研究均认为Cleaved caspase-3的表达水平与caspase的活化密切相关 ...

大鱼1044 本人是新手，想请教一下各位老师或者高手关于用DMSO溶解sp600125的相关问题。一、sp600125是固体，无法准确称取想要的剂量，如何用DMSO配置一定浓度的母液呢二、sp600125的保存温度为-20°，而且它属于MAPK抑制剂，而DMSO在常温下才呈现液体状，我将-20°保存的sp600125 加入在室温的DMSO中sp600125 会不会就已经完全变性了呢，整个过程是否需要低温操作呢？如果低温操作， ...

晓晓317481504 请问问siRNA能否在大鼠体内转染并且起干扰作用? 文献有报道就是说体内的RNAi也能够正常的起作用。请问有没有老师做过这种实验？谢谢slytjiaofei siRNA肯定在大鼠体内发挥干扰作用，有很多相关文献，如下两篇楼主可以参考！http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21571310http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8113414晓晓31 ...

coldwar911 原代细胞先用无血清DMEM孵育了24小时然后，然后实验组按不同的干预时间加入药物，理论上该药物应该能激活ERK通路，但WB结果竟然显示空白对照组的p-ERK 含量最高，比实验组还高，请问有没有大侠能解释？coldwar911 Thanks, I'll try.sadieshen 我也有相同困难，饥饿时间是不是不能太久本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好 ...

qqljwar 各位战友：小弟想通过蛋白水平去检测胃泌素的表达量，但不知道具体用什么方法，有没有哪位前辈做过这方面的检测，指导下小弟，感激涕零啊！forest22939 Western blot is direct method, second is choosing subtract.qqljwar forest22939:你好，胃泌素比较小，好像只要2kd左右，Western检测的效果不是很好，另外你说的subtract 是什么，忘赐教！ 谢谢。本文由丁香园论 ...

cpuyao 请教大家一个问题，我在药物处理后测定细胞的周期，随着药物浓度的增加，G2/M期比例增加（明显，浓度依赖），S期几乎没有变化，而G1期比例减少。是不是说明细胞阻滞在G2/M期？但是G1期和S期的现象怎么解释呢？随后我们测了凋亡，证明药物可以促进细胞凋亡，这些需要怎么联系到一起呢，第一次做，有好多不明白的地方，希望研究周期和凋亡的战友们帮忙分析一下，有没有哪些相关的文献？谢谢大家~xiaohuilang 细胞周期被 ...

俊桃桃 想问问，有没有一些预测网站。通过某些基因3'UTR区的rs位点预测出与该点相结合的microRNA呢？谢谢lide658 目前好像没有这样的网站，所以你只有先确定靶基因然后与其结合的microRNA位点是否存在多态，而且一般要求SNP位于microRNA的种子序列中最好。俊桃桃 谢谢你，我是已经靶基因（通过文献查到的）不是通过软件预测的。但是我怎么知道他和microRNA结合的区域呢在哪里，更不知道结合区域是否存 ...

wj1989113 最近在构建一个质粒。根据我的目的基因序列，筛了两个酶切位点，而且只有这两个酶切位点能用，XbaI和EcoRI,设计引物时XbaI 加了两个保护碱基，EcoRI 加了三个保护碱基。根据takara公司的说明，选择了共用Buffer1xM,酶切，连接，转化之后挑克隆，抽质粒酶切鉴定，发现都是空载体。网上说XbaI对甲基化敏感，有什么对策？因为我别无他选，只能用这两个酶。不胜感激！！！gisang 双切之后跑电泳了吗，有 ...