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joo 如题，A B C是3个蛋白，目前见到到A结合B使B-C复合物减少，我的问题是这样我能说A与B的结合竞争性抑制了B与C的结合吗？因为A结合B还有可能使B发生了变构从而影响了其与C的结合，在写论文的时候这个“竞争性"抑制的词是不是准确呀？westernblotx joo wrote:如题，A B C是3个蛋白，目前见到到A结合B使B-C复合物减少，我的问题是这样我能说A与B的结合竞争性抑制了B与C的结合吗？因为A结合B还有可能使B发生 ...

songland 以往的染料划痕试验可以测定GJC功能，但已证明效果不佳，现在还有新的方法吗？求详细可行的操作方法本人目前唯剩下25个丁当，不足感谢热心的仁兄仁姊。lianzit 电偶联，经过放射性活性代谢物转移的代谢协同，微注射和荧光染料的转移，刮除负载与荧光染料的转移，荧光光漂白后的恢复。你可以直接百度或者在图书馆上搜！ishow11 利用激光扫描共聚焦显微镜结合荧光漂白恢复技术检测GJC效果不错本文由丁香园论坛提供 ...

shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图:现有两个问题想请教各位高人（1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？（2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该如何进行改造？烦请各位不吝赐 ...

赵东生 哪位大侠知道有没有哪家公司提供MicroRNA引物（茎环+上下游）设计服务的啊？另外有没有相关软件啊？liqiangs invitrogen公司可以，颈环结构引物好像是ABI的专利，invitrogen和ABI合并了所以这方面应该是强项myskite 自己设计http://www.dxy.cn/bbs/thread/17643030#17643030本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验 ...

xuquan897 求教一个关于测序的问题：我的大概1000bp左右的质粒拿去测序公司做正反向测序，结果正向测的很好，而反向给的报告是双峰，结果见下图，不知道是什么原因呢？请教各位高手。多谢多谢！file:///C:\Documents and Settings\yuanyuan.xu\Application Data\Tencent\Users\183410312\QQ\WinTemp\RichOle\%`GN))OT@@(C005`91(Y` ...

zwmc 很多文章使用这种方法来表达miRNA, 而且我在论坛上看到很多坛友也比较推崇这个方法。但是我最近遇到了问题：我想要克隆表达的miRNA具有5p和3p两种剪切形式，理论上我把包含该pri-miRNA的基因组片段到表达载体在细胞里表达之后，这种情况下我表达出来的miRNA是兼有5p 3p两种形式？或者是只有一种呢？很困惑，请大家不吝赐教！吴佰霖 1. 查文献，看这个miRNA的5p和3p是否都有表达，还是以其中一个为主要产 ...

xylish1 菜鸟一枚，目前要做HER-2（膜蛋白，185KD）western blot ，求教各位，一抗哪个公司的好？使用时抗体浓度，转膜时间及注意事项，多谢！zhe992000 搭车求助，我想验证肿瘤组织中透明质酸（hyaluronan）的表达水平，这是一个糖蛋白，主要在细胞外基质中表达。在文献上一般是通过透明质酸合成酶的水平 或者透明质酸水解酶的水平来间接判断透明质酸的表达水平，我想直接测定透明质酸的表达量，不知道能不能做we ...

443201299 吉玛的shRNA质粒怎么样??吉玛的shRNA质粒最便宜，但不知道它的质量如何，有谁用过吗？感觉质量怎么样？西厢蔷薇 买过几次，一般吧。443201299 下调效率怎么样？？shylook 还是不错的443201299 吉玛的shRNA质粒载体好像是最便宜的！西厢蔷薇 我那个基因本来就是抗外源基因的，所以下调的比较差，买了两次，有一个下调了25%左右华因康基因公司 吉玛的东西一般吧epdn 广州锐博的也不贵噢。akachan ...

songyong 大家好，我在检测人子宫内膜中的NF-kappaB，但做了几次都没做出来，怎么办呢？我一抗用的是CST的，按他们公司的Protocols做也做不出来。大家可以推荐一个NF-kappaB可用于免疫组化的一抗吗？谢谢！genebio8890 投诉，换货小小困惑 我也做你的因子，我是不太懂，你用的是什么剂型的啊？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...

luking2006 我用H9C2心肌细胞系做心脏的自噬研究，想请教细胞系传代次数多30代，会对实验结果造成影响吗？看到有文献说细胞系传代多了会引起基因表达的改变。是这样吗？很急切，先谢谢大家了。我前期用传代多的细胞系做出的实验结果和大体的不一致，不知是不是这个原因。anyi63 我们用的是h9c2细胞株，细胞系是细胞株50代以后遗传突变带癌细胞特点，有可能在培养条件下无限传下去cxc11 战友：你们在哪里，我需要这个细 ...

wj1989113 最近一直在做慢病毒载体，用的是第二代的三质粒系统，目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后，包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞，想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题：1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株，荧光都很亮，但是做PCR或者Western之后，加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。（条带都较亮）尤其是Western，几乎没有差异。2、感 ...

wx275411643 麻烦哪位高手帮助解答一下我现在做WB遇到的情况，我买的抗体说明书上写的目的条带分子量和实际曝光出来的不一样，Marker肯定没问题了，是国内公司的抗体，问过公司，他们说是蛋白被修饰了，所以会大点。我做的结果比说明书上的大了大概10KD（书上说39KD），不知道公司的解释能不能接受？抗体是多克隆的。就怕他们用别的抗体冒充我要的。zhe992000 看看你的蛋白质的分子量有没有问题？好多时候，蛋白在 ...

fancygirljj 课题是研究发病机制的，打算做有关信号通路方面的实验，但一头雾水，对这个领域十分陌生，不知该从何下手呢？请教各位高人~~感激不尽~~~fancygirljj 在下实在是个level zero,请各位不吝赐教~~~怎样找到我要研究的受体的信号通路呢？fancygirljj 自己顶一下~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

栽梧桐等凤凰 请问细胞系表达的蛋白能否用来包被酶标板，进行单克隆抗体的筛选。就怕目的蛋白的含量不够高，做ELISA时阴性阳性做不出差异。hahadongwr 可以用来包被。你可以先对表达的蛋白进行纯化，而后测定纯化后蛋白的浓度，1-5ug/mL的浓度便可以进行后期的包被和ELISA检测。devil123 同意楼上的，一般利用杆状病毒等表达系统进行蛋白表达，产物可以用Elisa检测，如表达量低的，可以考了做westen，更敏感 ...

364587256 向各位战友求教：看过多篇英文文献，关于p-AKT的western blot检测时间，有的为1-2小时，有的却有24小时，差别之大，想知道原因。见到以前战友问过类似问题，可是关于这个时间点的把握始终弄不明白，还望实验室大虾不吝指教！ly86400 啊？我们就是用常规做法。。检测的效果还可以啊~你的检测时间是什么概念啊？364587256 ly86400 wrote:啊？我们就是用常规做法。。检测的效果还可以啊~你的检测时 ...

zhuzixiang HCT116 colon cancer cells and HCT116 p53-/- cells。请问国内哪里有这两种细胞？愿意交换或者购买。谢谢！版主woxingwosu留言:到丁香通看看？xxiaozhi 同问，谢谢！tangwt1988 我这有HCT116。可我在上海sfwsdfsdf 同问，大约要多少钱呢？juebizhidian 请问楼上现在手里有没有这两种细胞啊？ 我的实验刚好也要用到他们cpuyao juebizhidian wro ...

xiaoqin813 我打算做DNA甲基化的MSP，阳性对照（完全甲基化的DNA）可以通过SssI酶处理获得。但是阴性对照（完全未甲基化的DNA）大家一般是怎么获得的，现在有些公司卖这两种对照DNA。还有其他什么方法可以得到吗？谢谢大家指点。waterbeijing whole genome amplificationDoes anyone hear of 5-hydroxymehtylation? How to prepare 5-hydroxymeht ...

xiujing_001 各位高手：我正在做信号通路，请问如何知道一个蛋白的磷酸化位点，比如PERK（protein kinase R-likeendoplasmic reticulum kinase）？多谢了！biolinkphilic 一般蛋白的磷酸化位点就是位于苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸上xiujing_001 有查找磷酸化位点的工具吗？比如软件之类的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成 ...

lvxue1021 我分两次提的心肌的RNA，同是我的空白组。然后PCR、电泳，但是电泳后的目的片段长度第一次在200bp左右，第二次在300bp左右，而200bp左右的才是我要的目的片段。到底是怎么回事啊，大家有没有遇到过这种诡异的事情。ningmeng1119 理论上不会出现这样的情况，你再做一次看看结果怎么样，中间的操作有没有什么不一样的？lvxue1021 操作都是一样的。第一次做的一个样，因为第一次做，比较精细，第 ...

小瘪瘪 我现在要做细胞色素C(cyt C)的western ，买的抗体型号是SC-13156，请问有人用这个抗体么？怎么样？我要做这个，蛋白预染marker要买多大的？就是要根据cyt C的蛋白大小而定。还有就是做cyt C一抗的稀释度是多少？请有经验的前辈高手指！！yangbxys 没有做过cyt C，但是做过WB。每次买抗体，都有说明书，说明书会告诉你比如做WB时出现条带的大小，已经建议的WB稀释浓度。建议lz好好看看说明书。林杉2012 ...