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若目的条带未出现，或很淡，可试用以下方法增强发光强度：1．用清水漂洗膜数分钟，重加发光液进行曝光，可延长曝光时间；2．将膜在 PBST 或 TTBS 中洗涤 30 min 或更长，期间至少换 2 次液；3．封闭 40~60 min；4．一抗杂交，室温 1 h。37℃ 1 h 会更强，但可能增加非特异条带；5．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期间换 2 次液；6．二抗杂交，37℃ 1 h；7．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期间换 2 次液；8．发光鉴定；9．若条带仍未出现或很淡，可以再用 PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min，期间换 2 次液；10．三抗杂交 ...

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。1．HRP-ECL 发光法：将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1-2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定 Marker，进行 ...

封闭及杂交在做杂交时，个人建议：还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育，这样节约抗体。操作开始：1. 将膜用 TTBS 从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭 1 h。必要时可先用丽春红染色（2%乙酸，0.5%丽春红的水溶液）观察蛋白条带，再用去离子水和 TTBS 将丽春红洗脱后封闭，如用蛋白 marker 则可省略此步。2. 将一抗用 PBST 稀释至适当浓度（在 1.5 ml 离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保 ...

转膜篇1. 转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于水上浸 2 h 才可使用。要领：（1）用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。这样由于毛细管作用可使整个膜浸湿。若膜沉入水里，膜与水之间形成一层空气膜，这样会阻止膜吸水；（2）个人感觉其实转膜之前浸湿一下就 ok 了，没有多大问题，可能按照上述操作结果会更好。2. ...

电泳篇开始一、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。二、灌胶与上样1. 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。注意：可以用 1% 琼脂糖在垂直电泳槽的左. 右和下部封边，五分钟后重复一次，这样可以保证基本不漏胶。2. 按前面方法配 10％ 分离胶，加入 TEMED 后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用 10 ml 枪吸取 5 ml 胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一 ...

一、单层贴壁细胞总蛋白的提取：1.倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。2.每瓶细胞加 3 ml 4℃ 预冷的 PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将 PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。3.按 1 ml 裂解液加 10 μ PMSF（100 mM），摇匀置于冰上。（PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）4.每瓶细胞加 400 μ 含 ...

WB 实验在提取完蛋白质后，就要对蛋白含量进行测定测定方法如下：一、制作标准曲线1、从-20℃ 取出 1 mg/ml BSA，室温融化后，备用。2、取 18 个 1.5 ml 离心管，3 个一组，分别标记为 0 μg，2.5 μg，5.0 μg ，10.0 μg ，20.0 μg ，40.0 μg。3、按下表在各管中加入各种试剂。4、混匀后，室温放置 2 min。在生物分光光度计上比色分析。二、 检测样品蛋白含量1、取足量的 1.5 ml 离心管，每管加入 4℃ 储存的考马斯亮蓝溶液 1 ml。室温放置 30 min 后即可用于测蛋白。2、取一管考马斯亮蓝加 0.15m ...

质谱仪的离子化方式有：1、电子轰击电离。2、化学电离。3、场电离。4、场解吸电离。5、快原子轰击电离。6、基质辅助激光解吸电离。7、电喷雾电离。8、大气压化学电离等。

中药离心机类型有多种。1、按分离目的可分：中药实验室离心机和中药工业离心机。2、按速度可分：低速中药离心机和高速中药离心机。3、按结构可分：台式中药离心机和落地式中药离心机。4、按转子类型可分：水平转子中药离心机和角式转子中药离心机等。5、按分离功能可分：生产型中药离心机和制备型中药离心机。

色谱仪的衍生化主要是为了提高目的物的可检测性。对于气相色谱，主要是为了增强目的物的挥发性或改善目的物的极性。对于液相色谱仪，主要是为了提高检测器对目的物的响应。一、衍生化分类：1、柱前衍生：在分析物经过色谱柱前与衍生剂反应，反应产物在色谱柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物。2、柱后衍生：分析物在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，检测的是衍生产物。二、适用的化合物：生物酸、生物碱、胺类、抗生 ...

四极杆质谱仪种类有多种。1、按分析目的可分：实验室四极杆质谱仪和工业四极杆质谱仪。2、按质量分析器的工作状态可分：静态四极杆质谱仪和动态四极杆质谱仪。3、按进样方式可分：直接探针进样四极杆质谱仪和色谱进样四极杆质谱仪等。4、按离子化方式可分：电子轰击电离四极杆质谱仪、化学电离四极杆质谱仪、场电离四极杆质谱仪、场解吸电离四极杆质谱仪、快原子轰击电离四极杆质谱仪、基质辅助激光解吸电离四极杆质谱仪、电喷雾电离四极杆质谱仪 ...

液相色谱仪分类有多种。1、按分离目的可分：实验室液相色谱仪和工业液相色谱仪。2、按固定相物理状态可分：液液色谱仪和液固色谱仪。3、按色谱柱形状可分：填充柱液相色谱仪和平板液相色谱仪。4、按分离原理可分：吸附液相色谱仪、分配液相色谱仪、离子交换液相色谱仪和凝胶液相色谱仪。5、按分离模型可分：线性液相色谱仪和非线性液相色谱仪。6、按分离动力学过程可分：迎头液相色谱仪、顶替液相色谱仪和洗脱液相色谱仪。7、按操作压力可分：低压液 ...

气相色谱仪填充柱柱效比毛细管柱低，因此需要针对不同的样品配备许多不同的填充柱。如果使用毛细管柱，三支毛细管柱可分析 90% 以上的 GC 样品，四支毛细管柱可分析几乎所有 GC 样品。高效气相色谱仪毛细管柱具有渗透性好、相比大、总柱效高和柱容量小等特点。一、渗透性好：一般毛细管柱的比渗透率约为填充柱的 100 倍，在同样的柱压下，可使用更长的毛细管柱，而载气流速可保持不变。二、相比大：相比大，传质快，有利于提高柱效。K 值小有利于快速分析。毛细管柱的液 ...

有机质谱仪分类有多种。1、按分析目的可分：化验室有机质谱仪和工业有机质谱仪。2、按质量分析器的工作原理可分：单聚焦有机质谱仪、双聚焦有机质谱仪、四极杆有机质谱仪、离子阱有机质谱仪、飞行时间有机质谱仪和傅里叶变换离子回旋共振有机质谱仪等。3、按结构可分：台式有机质谱仪和落地式有机质谱仪。4、按联用方式可分：有机气相色谱质谱联用仪、有机液相色谱质谱联用仪、有机毛细管电泳质谱联用仪和多级有机质谱仪等。

实验室色谱仪分类有多种。1、按流动相物理状态可分：实验室气相色谱仪、实验室液相色谱仪和实验室超临界流体色谱仪。2、按色谱柱形状可分：实验室填充柱色谱仪、实验室毛细管色谱仪和实验室平板色谱仪。3、按分离规模可分：微型实验室色谱仪、小型实验室色谱仪和大型实验室色谱仪。4、按结构可分：台式实验室色谱仪和落地式实验室色谱仪。5、按用途可分：实验室生物色谱仪、实验室制药色谱仪、实验室化工色谱仪、实验室食品色谱仪、实验室蛋白质色谱 ...

电感耦合等离子体质谱仪（以下简称质谱仪）接口的功能是将等离子体中的离子有效传输到质谱仪。接口是质谱仪最关键的部分。质谱仪和等离子体之间的温度、压力、浓度存在巨大差异，质谱仪要求在高真空和常温条件下工作（质谱仪要求离子在运动中不产生碰撞），而等离子体是在常压下工作。如何将高温、常压下的等离子体中的离子有效地传输到高真空、常温下的质谱仪，这是接口技术所要解决的问题。接口必须使足够多的等离子体在这两个压力差异巨大的区 ...

无机质谱仪类型有多种。1、按分析目的可分：实验室无机质谱仪和工业无机质谱仪。2、按分析规模可分：小型无机质谱仪和大型无机质谱仪。3、按结构可分：台式无机质谱仪和落地式无机质谱仪。4、按进样方式可分：间歇式进样无机质谱仪、直接探针进样无机质谱仪和色谱进样无机质谱仪等。5、按联用方式可分：无机气质联用仪、无机液质联用仪、等离子体无机质谱仪和无机串联质谱仪等。

聚合物离心机类型有多种。1、按分离目的可分：化验室聚合物离心机和工业聚合物离心机。2、按分离功能可分：制备型聚合物离心机和分析型聚合物离心机。3、按结构可分：台式聚合物离心机和落地式聚合物离心机。4、按温控可分：聚合物冷冻离心机和聚合物常温离心机。5、按容量可分：微量聚合物离心机、小容量聚合物离心机和大容量聚合物离心机。

色谱仪的衍生化分类有多种。1、按是否形成共价键可分为：标记反应和非标记反应。（1）标记反应是在衍生反应中，分析物与标记试剂之间形成共价键。（2）所有其它类型的衍生反应，如形成离子对、光解、氧化还原和电化学反应等都是非标记反应。2、按衍生反应的场所可分为：柱前衍生和柱后衍生。3、按是否与仪器联机可分为：在线衍生和离线衍生。

飞行时间质谱仪类型有多种。1、按分析目的可分：化验室飞行时间质谱仪和工业飞行时间质谱仪。2、按分析对象的状态可分：飞行时间原子质谱仪和飞行时间分子质谱仪。3、按分析对象的属性可分：飞行时间有机质谱仪、飞行时间无机质谱仪和飞行时间同位素质谱仪等。4、按用途可分：飞行时间生物质谱仪、飞行时间制药质谱仪、飞行时间化工质谱仪、飞行时间食品质谱仪、飞行时间医用质谱仪、飞行时间酒精质谱仪、飞行时间催化剂质谱仪、飞行时间试剂质谱仪 ...