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位点特异核酸内切酶涉及核酸生物化学的许多方面。限制酶及相关酶已成为作用于 DNA 的酶的典范。通过理性蛋白设计，投入了无数的精力试图改变其特异性。但是，从整体上说，成功很少，大概是由于其识别能力高度冗余，并且识别和催化紧密地耦合。本章描述少数几个成功改变特异性例子之一，即转换错配修复核酸酶 MutH，当被 MetS 和 MutL 刺激的时候，此酶在半甲基化位点 d ( GATC) 切开一缺口——转化为切割全甲基化以及半甲基化和未甲基化 DNA 的变体。本章将描述此设计项目中所涉及的各种步骤，从对结构的分析和对负责感知甲基化状态的候选氨基酸残基的鉴别，到产生和鉴定针对半甲基化 d (GATC)位点具有不同特异性的 MutH 变体。

我们发展了用人纤连蛋白的第 10 个纤连蛋白类型Ⅲ结构域（FNfnlO)作为框架以显示用于与其他分子结合的多重表面链套的用法。我们把具有新的结合功能的 FNfnlO 变体称为“独体（孤体、单小体)”（FNfnlO 是一个由 94 个氨基酸组成的小蛋白质，它具有近似免疫球蛋白折叠的β三明治结构）。它是局度稳定的，没有二硫键或金属离子，它在细菌中高水平地表达为正确的折叠形式。这些期望的物理性质，使得 FNfnlO 框架与其他任何展示技术，事实上都可以比较。本章描述实物库构建和筛选以及独体的生产。

在 DNA 结合模体中，（Cys)2(His)2 类型的锌指模体具有大的操控潜力。为新的 DNA 结合蛋白设计，锌指模体提供了有吸引力的框架。特别是为产生新的、具有全新的 DNA 结合特性的，如长 DNA 链识别、DNA 弯折和 AT 富集序列识别——人造锌指蛋白，基于结构的设计技巧是特别有价值的。在此，基于最新的实验结果，描述为设计多重锌指蛋白以用于目标 DNA 序列识别、DNA 弯折锌指蛋白、（His)4类型的锌指蛋白和 AT 识别锌指蛋白的新技巧。

体外循环心脏手术患者，因血液暴露于非生理的界面，血液中的有形成分经受机械挤压，凝血因子遭受到不同程度的破坏，引起术后患者引流量过多和输血量增大。2016年1月，发表在《Crit Care》的一项研究显示，与新鲜冰冻血浆（FFP）治疗相比，使用凝血酶原复合物（PCC）与术后失血和红细胞（RBC）输注需求降低具有相关性。但是，处方PCC可能与较高的术后AKI之间存在相关性。 背景：需要外科再探查和成分输血的心脏手术后出血可能与发病率和死亡率增加相关。尽管PCC用于治疗出血性疾病效果很好，但关于用于体外循环后的有效性和安全性的研究非常有限。 方法：研究人员对2005年1月至2013年12月间3454名连贯进行心脏手术的患者进行了观察性研究，旨在研究PPC替代FFP作为一线凝血酶治疗的有效性和安全性。从2012年1月起，PPC成为心脏术后出血干预的单一一线治疗药物。 结果：在进行1对1倾向性评分匹配分析后，共纳入225对进行PCC（平均剂量1500 U）和FFP（平均剂量2 U）治疗的患者。使用PCC与24小时内术后失血显著减少具有相关性(836±1226 vs

诊断慢性乙型肝炎可能需要进行几项血液检测，以确定感染是否对肝脏造成损害，并明确感染阶段。当决定患者是否需要进行治疗以及应如何监测时，医生会考虑所有这些结果。 现在，我们一起来讨论上述检测之一，HBV DNA检测或病毒载量检测，看看它如何快速提供患者的乙肝感染信息。 血清中乙肝病毒DNA水平是乙肝病毒复制的可靠定量指标。聚合酶链反应(PCR)技术是最常用的检测HBV DNA的方法，可以检测血液样本中迅速生成的HBV DNA片段。目前，病毒载量通常采用“国际单位/毫升” (IU/mL) 为单位。然而，在过去，它的数量单位以拷贝/升(拷贝/毫升)来表示，如果检测到的HBV DNA≥105拷贝/毫升说明乙肝病毒复制较活跃，体内的病毒量较多。在一些地区和实验室，仍然使用这一计量单位。如果需要将拷贝换算为国际单位，大约为1个国际单位≈5.6拷贝，国内一些厂家试剂盒的换算系数为1。因此，面对不同试剂的HBV DNA检测报告，需要了解检测试剂国际单位与拷贝间的换算系数，才能进行比较。 HBV DNA 检测的敏感性可能受不同实验室测试的影响，因此，最好使用相同的实

一、梅毒体外诊断试验 1.梅毒的体外诊断试验分类 梅毒的体外诊断试验按试验所用抗原分为非密螺旋体抗体试验(nontreponemal antibody test, NTrAT)和密螺旋体抗体试验(treponemal antibody test, TrAT)。NTrAT包括快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin circle card test, RPR)、不加热血清反应素试验、性病研究实验室试验和甲苯胺红不加热血清试验(tolulized red unheated serum test, TRUST)等, 均以心磷脂、胆固醇和磷脂酰胆碱等为抗原检测非特异性的抗心磷脂抗体(反应素), 故存在生物学假阳性。 2.检测特异性抗TP抗体的筛查试验 在检测特异性抗TP抗体的筛查试验中, 荧光TP抗体吸收试验(fluorescent treponemal antibody absorption, FTA-ABS)、TP血球凝集试验(treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA)和

在实验过程中，由于样品的各种性质差异，只有选择了正确的离心方法，才能获得预期的分离纯化结果。常用的离心方法主要有差速离心法、密度梯度离心法。其中密度梯度离心法又可细分为速率区带离心和等密度梯度离心法。小贝离心学堂将对这三种常用的离心分离方法分别进行专题介绍。离心方法——差速离心 差速离心法 (differebtial velocity centrifugation method) 又称离心力差分离法。原理是利用样品中各组分沉降系数的 ...

吴世木医师正在工作 吴世木医师接受医院嘉奖兴义市人民医院医学检验科全体成员历经三年的攻坚奋战，终获ISO15189国际质量标准认可，成为贵州省第三家、全国县级医院第四家通过此项认可的医学实验室。出具的检验结果在全球170多个国家的上万所医院均能认可。一个县市级医院的医学实验室走向国际，这个跨越的背后，是一个团队1千多个日日夜夜的奋战，而这个团队的背后，有一个人坚守了23年。这个人，就是兴义市人民医院医学检验科学 ...

为避免污染，必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室。 临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必须有明确的标记，以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区（简称扩增区）至产物分析区，避免 ...

实验室认可的要求 良好的实验室惯例要求每个检测/方法/仪器系统在其用于患者检测之前，需提供全部的性能参数，无需要考虑实验室是否首次使用。 如适用，实验室必须提供每个用于检测血液项目的准确度、精密度、分析灵敏度、干扰和可报告范围(也就是，分析测量范围(AMR)和临床可报告范围(CRR))的数据。 检验程序验证的内容 CNAS-CL38：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明》 检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包括： 1、精密度 2、正确度 3、参考范围 4、分析测量范围 5、分析灵敏度的验证 6、临床可报告范围 分析系统的技术要求 精密度的方法学评价方案 •CLSI EP5-A2. Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods. 2004. –1×1×20实验方案，可用于临床实验室，反映的是室内精密度即总精密度 CLSI EP15-A2.User Verificati

众所周知，糖化血红蛋白（HbA1c）是人体血液中红细胞内血红蛋白与血糖结合的产物，其寿命约 8～12 周，且由于不因单次血糖水平的波动而受影响，因此其能够较好反应 DM 患者过去 2～3 月血糖控制水平。目前 ADA（美国糖尿病学会）建议其控制在＜7%，IDF（国际糖尿病联盟）以及我国控制标准建议 HbA1c＜6.5%。 一直以来 HbA1c 都被认为是 DM 治疗监测的「金标准」，但近期，来自爱尔兰高威大学内分泌系的医学教授 DerekT.O Keeffe 等人通过临床病例对 HbA1c 提出了新的见解，并将临床病例及其研究于 2016 年 2 月 9 日发表于 JAMA。 病例概况 男性，76 岁，主诉多尿、烦渴，BP 126/64 mmHg ，BMI 38 kg/m2。18 个月前确诊为 T2DM（空腹血糖 11 mmol/L），给予二甲双胍降糖治疗 12 个月后停药，停药时 HbA1c 为 6.4%。患者每日监测血糖，且血糖基本高于 350 mg/dL。患者有高血压、遗传性球形红细胞增多症、胆囊切除术病史。实验室检查如下： 根据以上实验室检查结果，大

生命科学的迅速发展离不开实验室通用设备所做的贡献，IKA 优质的实验室通用设备在此领域的应用由来已久。著名的磁力搅拌器和 lab dancer「小舞灵」涡旋振荡器是每个生命科学实验室必备的工具。经过多年的发展，IKA 已经形成具有自己特色的生命科学产品线，为各个方向的科学家提供更多的研究方案。在这里，德国 IKA 与您分享来自全球顶尖生命科学实验室的心得——样品前处理的各个环节都不容忽视！任何一个细节甚至手法，都会影响到核酸的释放程 ...

我们都知道基因剪刀 CRISPR/CAS9 技术今年大火，之所以这个技术这么火和其对基因操作的方便性，高效性，准确性及高性价比是分不开的。CRISPR/Cas9 是一种能够对任何物种基因组的特定位点进行精确编辑的技术。其原理是核酸内切酶 Cas9 蛋白通过导向性 RNA (guide RNA， gRNA) 识别特定基因组位点并对双链 DNA 进行切割。一旦 DNA 链被切开后就能对特定基因引入敲除、敲入、突变等编辑。图注：基于非同源末端修复和同源重组原理可进行基因敲 ...

腺相关病毒（AAV）作为一种安全、持久、高效、高特异性的基因操作工具，在生物学特别是神经生物学领域中被广泛使用。许多新手对于 AAV 的使用往往是知其然而不知其所以然。这篇短文将以图文结合的形式争取让大家在最短的时间内全面了解这种病毒工具。什么是 AAV？野生型 AAV 是一种复制缺陷型微小病毒，需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。而我们做实验用的是不需要辅助病毒的重组 AAV 病毒（rAAV）。将目的基因的 CDS 区序列或者 RNAi 干扰序列 ...

样品：重组胰蛋白酶，比活 4000USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma.图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定1. 最适温度的研究将底物 BAEE（0.25 mM）分别置于 4℃、15℃、20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃ 和 70℃ 水浴中温浴 20 min，加入相同体积的 RPT 酶液测定 rPT 的活力，结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。2. 温度稳定性的研究 取 10 mg/ml RPT 纯酶液稀释 10 倍后，分别置于 4℃、15℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60 ...

样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma.图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定1. 最适 pH 的研究准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25 mM Gly-NaOH(pH 9~12)，所有缓冲液均为 25℃ 下配制。底物在 25℃ 温浴 10 分钟后，开始测活。2. pH 稳 ...

1、pH 稳定性将 rCPB 纯化后的酶液稀释至不同 pH 的 50 mM 缓冲液中 pH 分别为 3.0、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、10.0、11.0、12.0，使酶液的终浓度为 1 mg/mL，25℃ 孵育 12 h 后测活。图 1 rCPB 酶液的 pH 稳定性2、最适 pH测定 rCPB 纯酶液浓度为 1 mg/mL, 在不同 pH 条件下的催化速率，底物浓度为 0.1 mM/L，pH 分别为 3.0、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、7.65、8.0、8.5、9.0、10.0、11.0、12.0，pH3.0-5.0 用 50 mMNaAc-H ...

目前市场上的血清品牌五花八门，除了名气最大的 Gibco，Hyclone 之外还有很多其它的进口品牌和国产品牌。价格也高低不一，可以称得上鱼龙混杂，血清的水深的很。很多不法奸商为追逐高额利润，大肆造假，炮制出许多所谓 Gibco，Hyclone 等「原装进口胎牛血清」，甚至很多国家严禁进口的疫区血清或者超级紧俏的血清货号，他们都能提供「大量现货」，坑害广大科研工作者，造成实验失败，毕业延期等恶劣影响。特别是近年来，进口血清紧俏，价格 ...

以更少量的样本完成对更多生物标志物的分析。由卓越的免疫试剂供应商开发，用于 Luminex® 平台，ProcartaPlex 使您可以在 25-50μL 的样本（血浆、血清、细胞培养上清液以及其他体液）。实现在 25-50μL 的样本中同时对多达 50 种因子进行检测与定量。该技术在多通道「类 ELISA」分析中，为每种靶标使用了经不同染色处理的捕获微球。相比于传统的三明治 ELISA 而言，ProcartaPlex 免疫分析可以在使用样本量少而时间相同的情况下，分 ...

钙调素（CaM) 是普遍分布的蛋白质，参与钙介入的信号转导。当 Ca2+ 流入时，CaM 获得强亲和力，结合各种带有一个或多个CaM 识别序列的胞内蛋白，启动或终止 Ca2+ 调控的信号串联。通过对 Ca2+-CaM 复合物的核磁共振和晶体学结构研究，我们已得到对 CaM 目标识别机制的深入了解。一个最直接的应用就是，基于蛋白质的 Ca2+ 传感器。它使用了 CaM 复合物和绿色荧光蛋白，原先称为“chameleon”（钙变色子，英文原意为 变色龙——译者)。钙变色子的主要优点是，它们可以在单个细胞中表达，并以特定组织或细胞为目标，测量局部 Ca2+ 的变化。本章描述有关的方法，包括钙变色子的克隆、鉴定它们的生物化学和生物物理特征，以及用数字荧光显微镜在单个细胞中使它们成像。