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前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了很多次，不过很快改善了实验方法，用两周重组了 14 个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。一、回收 PCR 产物在进行 PCR 扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，如 BamHI、HindIII，提前看好各公司的双切酶所用公用的 BUFFER，以及各酶在公用 BUFFER 里的效率。选好酶切位点后，在各 ...

和大家分享一下如何在新版 ensemb 查找启动子。首先，选择物种，输入基因名。比如： 搜索小鼠 Ptgs2 后，点击红圈处。点击红圈：点击 exons：5' upstream sequence 绿色部分为启动子所在位置，紫色部分是非编码区，黑色部分是编码区，蓝色区为内含子。但他所给的 5' upstream sequence 只有 50 bp，怎么办呢？ 屏幕左边有个 configure this page，点击：更改数字 save and close，即可看到你想要的结果：Ensembl 除了可以用来克 ...

在互联网上，有很多软件可以解决分子生物实验人员在做实验中遇到的问题。本文提供了序列分析、实验设计阶段比较实用的软件。软件主要用于酶分析、引物设计、同源序列比较、质粒作图、结构域（motif）查找、RNA 二级结构预测、蛋白二级结构 分析、克隆策略图谱、三维结构显示等方面的内容。1. 综合性软件这类软件要求对本阶段上述的大部分功能均具备，但这类软件大多在专项分析上没有优势。推荐软件：Omiga 2.0优点：你所能想到的大部分对核酸蛋白 ...

这两年在美帝净做克隆实验了，专家不敢说，但是熟能生巧，确实积累了不少经验。我把经验写下来，希望大家少绕点弯路。1. 载体构建俗话说用欲善其事，必先利其器。我强烈建议大家在做构建之前先找好工具，这样起的效果事半功倍。这里说个笑话，我们系有个新 PHD 学生，是个印度女孩，很聪明很刻苦，她所在的实验室也很好，不过除了她之外包括老板在内都是生物物理背景的，以前一个生物 POSTDOC 在的时候还好，这个 POSTDOC 一走，整个实验室对分生就只有 ...

SCI 论文不好写，主要障碍在英语上，其实就像以前考四六级考研一样，撰写也是有规律可循，有模版可靠。Abstract越简单越好，字数控制在 150～250 words。具体怎么写呢？先简单描述一下课题的前沿背景，然后引出自己的实验（In this paper…. or Here, we…）主要陈述实验结果，可稍带提一下所用到的重要方法的名称，然后说明你的结果的意义 These data suggest….；最后总结拔高 In a word…. or In summary…..。举个栗子：Ac ...

俗话说，兵欲善其事，必先利其器。掌握一些好的软件，可以让你的科研工作达到事半功倍的效果。今天随我一起来看看分子生物学常用的一些软件，主要包括分子克隆、实验记录、文献管理。Primer Premier 5Premier 是由加拿大的 Premier 公司开发的专业用于 PCR 或测序引物以及杂交探针的设计和评估的软件。主要界面有序列编辑窗口（Genetank），引物设计窗口（Primer Design），酶切分析窗口（Restriction Sites ...

陆陆续续地回到实验室，该重操旧业啦。生物学霸今年会给大家呈上更多最新技术及解读，带你装逼带你飞。今天带给大家的是冷泉港二月期刊推出的最新实验技术，一共有 五个，学起来。CRISPR–Cas9 技术构建转基因鼠Editing the Mouse Genome Using the CRISPR–Cas9 System先用细菌举例给你解释一下啥叫基因编辑，比如我想让细菌给我产一个蛋白，但是他不听话，所以我只好人工地敲掉一些基因，然后再额外给他一些基因， ...

一般单次剂量的注射剂通过灭菌的方法即可达到无菌，而对于采用低温灭菌、滤过除菌或无菌操作法制备的注射剂或多剂量包装的注射剂，均应在处方中添加适宜的抑菌剂，以防止在制造、贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染。抑菌剂具有抑制微生物细胞生长的能力，其过剂量也可能对人体有一定的安全性隐患，所以在注射剂处方中，抑菌剂的用量既要能抑制注射液中微生物的生长，又要求对人体无毒、无害。而对于加有抑菌剂的注射剂，仍要用适宜方法除菌， ...

著名俄国诗人 Paschkin 说过「灵感是在人们不断的工作中产生的」。因此，在你的科研活动之中，一定会产生许多的灵感，有些灵感信手拈来，有些灵感苦思而得，有些灵感受人启发。当你们抓住这些灵感并将它们付诸于实践之后，便有了许多精彩的发明和创新。一个小小的发明和创新为实验的顺利进行铺平了道路，我们收集了这些小发明，希望对你们有用。1. 病理实验dingle007：病理实验常需要专业人员看片，对炎症细胞浸润我做了个设想：即在同一组 ...

概述肠球菌属（Enterococcus）细菌域，厚壁门，芽孢杆菌纲，乳杆菌目，肠球菌科；在环境中广泛存在（土壤、水、植物、动物）；人类胃肠道和女性的生殖道；不同种类的肠球菌的流行取决于宿主的不同，也受年龄、饮食和其他生理条件有关的因素影响。流行病学肠球菌是内源性和外源性医院感染的第三大病原菌（检出率仅次于金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌）肠球菌所致院内感染绝大多数为尿路感染（有资料统计，在引起尿路感染的致病菌中，肠球菌感染 ...

大家对大肠杆菌应该很熟悉，它是分子生物学里最常见的工程菌。基因克隆、蛋白表达，这些就是在大肠杆菌中实现的，这和大肠杆菌的结构密切相关。大肠杆菌 K12大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，棒状，约 2.5 微米长。有鞭毛，它的基因组由 4 639 221 个碱基对组成，至少编码 4 000 个基因。扫描电镜下的 E.coliK12 菌株最早是 1921 年从疟疾患者的粪便中分离得到，一直作为纯种保藏在实验室里，已有 75 年。大肠杆菌 K12 容易生长，并且关于它的代谢研究很多，因此它经常被用作 ...

有这么一位大牛科学家，他在《 Nature》上发表了 180 篇论文， 在《Science》上发表了 53 篇论文。想不想认识一下这位大牛呢？他就是 Robert M MayRobert M May，1936 年 1 月生于澳大利亚，悉尼大学物理学博士。1972-1975 年进入美国普林斯顿高等研究院，开启生物科学领域研究。1975 年成为世界著名的生态学者。他为人类作出哪些贡献？1. 出版专著 《模型生态系统中的复杂性与稳定性》这本书于 1973 出版。在该著作中，他一反当时人们普遍的认识，提 ...

记得硕士刚毕业时，大部分人的共识是差劲的硕士生往往找到好工作。 如今硕士毕业近 5 年，重新刷新了认识。何为差劲的硕士生？首先，这里的差劲绝对没有贬低的意思。其次，差劲也不是真的差生，而是特指一类硕士生。他们还挺聪明，又有点能力，但心思没全用在科研上。硕士期间，大部分时间他们不是潜心科研，而是去大公司实习，或者参加各种活动，交友广泛。因为没有花太多心思科研，所以发表的论文一般或者导师交代的任务完成得不够完美。自然，导师对他们也不 ...

经常提质粒吗？熟练之后，提质粒乃至质粒构建都很简单。但如果真问起一些质粒的细节，可能很多人回答不了。不信随我看看。质粒组成要素一个合格的质粒含有以下组成部分：复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如 Amp+ 、Kan+。多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加 poly（A）信号 可以起到稳定 mRNA 作用如 ...

我是一个身高 180，长得不怎么帅，身材有一些微胖，还曾 3 次被女朋友劈腿的科研单身狗。问我为什么会走上科研的道路？我只能说，当我上高中的时候，我是冲着当年流传甚广的「至理名言」：「二十一世纪是生物的时代」，才走上了生物医学的道路。那时，幻想着采用各种具有科幻色彩的技术手段，来改变自己和世人的命运。结果读了研究生和博士的时候，才发现，科研道路并没有想象中的那般美好。但此时，我也再无路可退。上研究生那会儿，由于刚进实验室，对实验一窍 ...

经常会有战友在版面上问：高敏 C 反应蛋白和常规 C 反应蛋白的区别，也有很多战友作出了较为科学的解释。但是总体来看，很多解释虽然正确，但过于「学术化」，用词太专业，导致很多战友难以理解。另一方面，我认识的很多临床医生，包括部分心内科的医生，都常常把这两个概念搞混，有时甚至让人哭笑不得。为便于大家理解这两个概念，我特地开个帖子，力争通过通俗易懂的语言来谈谈自己的看法。我不是生化专业的，只是看过一些高敏 C 反应蛋白的文献，所谈及的内容有不妥 ...

「菌落总数」是评价食品卫生质量的重要指标，其检测工作在某种程度上具有相当的不可比性，这就要求检测人员要严格执行科学的操作程序。国家标准GB/T4789.2 中只是简要提到了检测程序，对实际操作过程中容易出现的问题未作详细说明。本人通过实践及多次对比试验，现就检测中容易出现的问题，作一阐述。样品的制备和稀释倍数的选择对于冰冻的样品，在接种前要放到0~4℃的冰箱中解冻。固体样品要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料并混合 ...

1 设备与材料1.1 低温冰箱：-70℃1.2 高压灭菌器。1.3 多孔玻璃珠（或素烧瓷珠）：直径2~3 mm。1.4 商业化细胞冻存管（可选）。2 操作步骤2.1 将直径为2-3 mm 的瓷珠分装到小螺旋帽瓶中（每瓶最多装30 粒）制成冷冻管，高压灭菌。2.2 标记冷冻管。2.3 在无菌状态下打开冷冻管。2.4 在所保藏菌种的最适营养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期，进行纯度检查后，将菌株新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液，无菌操作将混悬液转入到冷冻管中。2.5 封好冷冻管并颠倒四至五 ...

菌种活化：干粉标准菌株 标准贮备菌株 工作菌株；1.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株：挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36℃±1℃ 培养18-24 小时。并观察菌落形态。a. 金黄色葡萄球菌：菌落凸起，圆形，不透明；b. 大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色；c. 铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素；d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明，镜检菌体有芽孢。1.2 白色 ...

尿液的主要是由血液通过滤过、重吸收以及排泄后，最终产生的代谢产物。由于尿液的排出对于人体的水、酸碱以及电解质平衡均具有重要的价值，且与血液循环、器官功能、组织稳定性具有密不可分的联系，因此通过对尿液的量、性质、组成进行分析，能够有效诊断疾病。泌尿系统疾病通过尿常规检验即可准确诊断，并为医师选择适宜的治疗方法提供参考价值。传统的尿液检验方法主要可分为肉眼检查、显微镜检查以及化学检查 3 种。而随着科技的发展，尿液化学分析仪 ...