刚接触 Western Blot 不久的用户,在选购 WB 设备时,经常会遇到仪器选型的问题:为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择,干式和湿式,那么哪种方法更适合我们呢?这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。我们一般会优先推荐大家选购 YRDIMES 快速半干转印系统,因为干式转印速度很快(常规转膜 30-60min,快速转膜 7-10min),操作也简单,并且 YRDIMES 快速半干转膜系统性 ...
MHC 四聚体(MHC Tetramer)是一类免疫学试剂,由四个主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)与抗原肽结合的单体分子组成,并标记有荧光,用于 T 细胞免疫分析的 MHC 四聚体检测(MHC Tetramer Assay,或称 MHC Tetramer Stain)。检测原理&应用领域MHC 四聚体检测技术于 1996 年由美国斯坦福大学医学院的 John D. Altman 博士所开发, 它在单细胞水平上标记目标 T 细胞,并通过流式细 ...
ChIP(染色质免疫共沉淀,Chromatin Immunoprecipitation)技术是现代分子生物学研究,特别是表观遗传学的机制研究中一种非常重要的研究手段。ChIP 技术的主要目的是研究目的蛋白(包括: 修饰组蛋白, 转录因子, 辅因子及其他染色质蛋白)在染色质上的定位及丰度分析。ChIP 技术可以帮我们解答特异性修饰组蛋白或转录因子在染色质上是如何分布的,通过分析它们的染色质定位可以为解码目的蛋白的功能提供帮助。以组蛋白 ...
上一篇分享了做好 ChIP 实验需要注意的一些细节。但是注意了这些细节,按照流程完成了实验就结束了吗?当然没有,接下来的问题又来了。得到了目的片段 DNA,但是怎么判断得到的片段是不是自己想要的呢?换句话说,怎么判断 ChIP 是不是成功呢?IP 之后的染色质经过洗脱,解交联,RNase A 和 Protease K 处理,抽提或 DNA 纯化柱回收(这些步骤类似于前面的检测超声效果)就可以获得目的蛋白结合的 DNA。后续的这些步骤对于有分子生物学基础的人来说并不会 ...
前言相对于过去常用的肿瘤细胞接种和免疫缺陷小鼠模型,基因修饰小鼠(GEM)模型是建立在天然完整免疫条件下的原发(de novo)肿瘤,因此,作为肿瘤学研究的工具, GEM模型更能模拟人肿瘤的组织病理学和分子学特征,表现为有更好的遗传异质性,其优势在于能反映肿瘤细胞自身,以及肿瘤微环境中细胞等相互作用因素,包括具有引起原发肿瘤开始形成到发展为转移性疾病的能力。GEM模型的建立及应用极大促进了肿瘤学研究领域发展与进步。目前 ...
手动细胞计数弊端颇多,不仅耗时、费力,而且有明显的限制条件。工作中,常常会遇到「我刚刚数到哪了」之类的问题。现在,科学家们都开始青睐自动细胞计数了,因为这项功能不仅解放了人力(太棒了!),而且消除了手工处理的种种「误差」。Vi-CELL XR全自动图像式细胞计数及活力分析系统一切设计皆为消除细胞计数过程的种种「误差」Vicell Phase 1-2自动染色孵育:体积时间·精准「无差」百图连续拍摄:多点取样·置信「无差」标准程序判读:逻辑规 ...
柱式法 Minute TM 胞质胞核分离试剂盒操作方法:A. 悬浮细胞样品(包括植物,细菌,酵母和真菌制备的原生质体)1.500Xg,3 分钟低速离心收集细胞,用预冷的 PBS 清洗一次2. 将细胞转移到 1.5 ml 离心管中,3000 rpm 离心 1-5 分钟,弃去上清。3. 按表格 1 加入适量的胞浆提取缓冲液(请注意样品及裂解液的比例,以达到最佳效果), 涡旋大力震荡 15 秒, 冰上孵育 5 分钟, 混匀. 接转胞质胞核分离步骤。表格 1,不同细胞体积应加入相应体积缓冲液细胞体积(ul) 胞浆提取缓冲液(ul) 胞核提取缓冲液( ...
脂肪组织特别是白色脂肪组织(WAT)已经被证实除了具有能量储存功能外,还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)中高脂肪和低蛋白含量,所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离,具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统,可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物 ...
膜蛋白具有许多重要的细胞功能,对生物体存在至关重要。他们具有超过60%的药物靶点,占细胞总蛋白的20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白,跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水,离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。使用表面活性剂进行质膜蛋白分离提取效率不高,还有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用,改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中,例如膜蛋白IP,Co-IP,酶检测,质谱分析实验,使用无表面 ...
细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程,通常表现为核浓缩,起皱,膜发泡以及DNA片段化。WB是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是WB也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用WB做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备,看你是不是这样做的:自配裂解液或者购买RIPA,加上样品研磨啊研磨,孵育啊孵育,然后离心扔掉沉淀(RIPA不可溶组分),取上清(R ...
荧光显微镜是利用特定波长的激发光照射被检物体产生荧光进行镜检的显微光学观测技术,已有100多年历史。在生物医学领域应用广泛,大多数实验室都有配备高端或者常规的显微成像系统,荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定 ...
CRISPR:细菌体内一串规律成簇的间隔短回文重复 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)DNA 序列,是大多数细菌及古细菌中一种获得性免疫系统。现在使用的 CRISPR/Cas 9 系统是由最简单的 type II CRISPR 改造而来,该系统由单链的 guide RNA 和有核酸内切酶活性的 Cas 9 蛋白构成。原理此系统的工作原理是 crRNA(CRISPR-derived RNA) 通过碱基配对与 tracrR ...
给你的细胞多一点关爱,它会给你的实验更多回报。各种细胞营养品,试剂耗材应有尽有,最低 0 元起活动时间:6.5-6.30丁香通官方推荐,国产大牌来袭让你不花钱,也能用到高端好用的仪器。立即免费试用活动时间:6.5-6.30
据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年NIH、ATCC、Nature和Science等对此多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定 ...
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法,然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做!这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时,磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分,处理不得当时,还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多,比如封闭问题,抗体问题,或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。然而,有一个常被大家忽视的重要原因就是蛋白样品制备所用的方法是否适合于磷酸化蛋白的提取?其实蛋白质提 ...
IBA 第三代 Strep-tag® 高效蛋白纯化系统,由 Twin-Strep-tag®搭配全新研发出的 Strep-Tactin®XT 组合而成。
如果结合充分优化的配色方案和优质的试剂,多色流式细胞术将成为同时检测、监控多个样品参数的强大工具。但是,数据质量在很大程度上取决于优化的配色方案设计和适当调整的仪器。以下 7 个秘诀可以帮助你改善流式细胞仪数据质量,避开多色流式细胞实验中的常见问题。
基于 FCM 的纳米颗粒(SMP)检测需要特殊的散射光参数设置。该参数的设置和标准化可以用微球作为 QC 工具实现。目标:采用流式细胞仪 (FCMr) 对 SMP 进行分析和计数。
确认过眼神,遇见“最物美价廉的”示踪细胞株细胞示踪技术广泛应用于活细胞在体内环境下的生物学行动,尤其是在细胞移植研究领域,对于细胞移植后在体内的存活,分布,分化,迁移,转归等的观察提供研究基础。科佰生物提供可以稳定表达Luciferase,GFP,RFP的示踪细胞株:上千株现货示踪细胞株,包含全身各个组织器官,物种包含人和小鼠,支持定制,满足您的全方位需求;母细胞经过STR鉴定,部分细胞做过体内异位成瘤验证;全部稳定 ...
2018年4月16日,发表在《Nature Neuroscience》上的一篇研究报道:小鼠跑得越快,它们的学习能力就越强,这两者之间不仅具有相关性,而且还存在因果关系。这意味着增加运动能增强学习。研究者们进一步探索其背后的机理,发现:跑步有利于提高学习能力,这可能与小脑有关。原文链接:https://www.nature.com/articles/s41593-018-0129-x