全部

在我们实验中，养细胞是所有实验的基础，肿瘤细胞培养过程中，总会遇到这样那样的麻烦，以下几种情况，你是否遇到，如何解决，大师兄给你指明一二三。如何判断细胞污染了？状态 1： 细胞培养液变浑浊了，经常见到是米汤样，黄色液体，一般认为细菌污染。状态 2：细胞培养基内含有能动的小黑点，一般认为是黑胶虫。状态 3：胞培养基清亮，但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质，有可能就是真菌感染。策略：细胞污染了就直接扔了，还得把培养箱用酒精棉球擦 ...

细胞培养的过程大概是这样的：失败—成功—体味—收获—思考—交流，你到了哪个阶段？不妨和我们一起来看看丁香园上各位站友养细胞的那些事。・・・心肌细胞培养体会记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了，换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题，大家都是公用的血清。当时我很迷惑，后来我向老 ...

实验中发现两个蛋白的表达有调控关系，如何用生信方法确认？以下几步简单粗暴，不得不试 （文字少，全是干图）先看两个蛋白有没有直接相互作用1. 肯定要先试试最著名的 STRING 了。STRING 官网 http://string-db.org。在首页左侧边栏中，选择 Multiple proteins，在右边输入框中输入蛋白名称和研究对象种类。随后不停的 continue，就能看到结果了。根据两个蛋白之间连线的颜色，可以判定两个蛋白的可能相互作用类型（K ...

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）能够快速测定细胞悬液中单个细胞的生物学性质，并可以对特定的细胞进行分选收集。广泛用于细胞生物学，免疫学，遗传学，基础医学等领域。接下来的 Protocol 中以小鼠的淋巴细胞为例进行细胞表面和胞内染色。一. 试剂准备Wash Buffer：PBS+1% FBS破膜剂（ICS）：用双蒸水配置 10 % Saponin（Sigma）。破膜固定剂：将配好的 ICS 用 4% 多聚甲醛稀释 100 倍ICS Wash Buffer：将配好的 ICS 用 W ...

常有人问，动物实验做到最后，才发现自己选错了动物模型，实验功亏一篑，不仅浪费实验经费也浪费时间精力。针对这样的问题，笔者对常见的小鼠品系进行介绍，希望帮助小伙伴们少走弯路。NU 小鼠NU 小鼠通常被称作「InbredNude」，即裸鼠，肿瘤学和免疫学研究中的扛把子。裸鼠无胸腺，缺乏 T 细胞，不能进行细胞免疫，抵抗力极差。想得到稳定的实验结果，饲养环境一定要洁净，强烈推荐 SPF 级的动物房，这样的深宫大院绝对是裸鼠健康生长的不二之选。笔者 ...

RCR 实验，就是检测逆转录病毒的可复制性。刚开始由同事负责这个实验，结果一直问题不断，后来由我接手，从失败到成功，历时两个月，感触颇深！我们检测的是 GALV（gibbon ape leukemia virus）病毒的可复制性，根据现有 paper 中的做法，一是通过 qPCR 检测 GALV 病毒某段特定序列，二是 PG4 细胞空斑实验。1qPCR 方法根据论文中的引物序列我们合成了引物，然后通过 SYBR 法来检测目的基因。一个很简单的 qPCR，看似一切都很正常，然而后续问 ...

最近 WB 的结果趋势不是很理想，因为给了蛋白 B 的抑制剂蛋白 B 却没有明显变化。于是大伙儿一合计，可能需要再看看蛋白质之间的相互作用，会不会是抑制剂影响了蛋白 B 和蛋白 C 之间的结合，而不是直接导致蛋白 B 的降解。大家都知道研究蛋白质相互作用的三大经典方法是：酵母双杂交（Y2 H），免疫共沉淀（CoIP）和 GST pulldown。结合我们课题组的这个实验，因为只需看看蛋白 B 和 C 之间的结合，而且已知蛋白 B 和 C 是会结合的，所以可能用 CoIP 最简便。那么问题来了，实验室里也没人做过 Co ...

不管是临床医生和科研工作者，我觉得二者的共同敌人都是一致的，那就是时间。作为一个临床医生，没（zen）事（me）儿（ke）的（neng）时候搞搞科研，必须想尽一切办法对付（挤出）时间。在开始 WB 之前的蛋白定量耗费时间有点长，如果用 BCA 法的话光孵育就需要半个小时，整个过程耗时接近 1 小时。因此为了配合快速 WB，我们同样需要一个快速蛋白定量的方法。因此今天我们来聊聊如何 1 分钟测出蛋白浓度。蛋白定量法开始之前我们有必要复习一下理论知识。蛋白定 ...

对于养细胞的人来说，可谓是谈 「污」色变，任何时候听见细胞污染晴空万里立马暴风雨，而细胞污染又是养细胞过程中，尤其是新手经常遇到的问题。 细胞污染是一个很广的范围，微生物的种类更是各种各样，不同的污染的原因不同处理也不同，因此掌握对常见细胞污染的识别至关重要。 自己也是从刚开始养细胞 3 天一个小污染 7 天一个大污染过来，也积累了些经验，自己整理归纳了一下，希望对养细胞的同学有所帮助。

基因的体外定点突变是常用的分子实验技术，主要用于研究蛋白质结构与功能关系或者验证 microRNA 与靶基因是否结合。今天为大家介绍下基因突变质粒的构建原理与方法。第一阶段：野生型质粒构建1. 引物设计：根据需要验证的基因序列，设计需要扩增的基因片段引物。引物设计方法如下：（1）引物 F：5’ 端 - 保护碱基序列 + 限制性内切酶 1 酶切位点序列 + 基因正向引物序列 - 3’端（2）引物 R：5’ 端 - 保护碱基序列 + 限制性内切酶 2 酶切位点序列 + 基因反向引物序列 - 3’端通过加入基因组 DNA 模板以及设计 ...

MCAO 实验全称即大鼠中动脉阻塞实验，是脑缺血常见动物模型。科研一线的小伙伴是不是每次做起来 MCAO 实验，都是腰酸背痛腿抽筋，哈哈，教你几招迅速搞定老鼠君们的办法，让你分分钟飞起来~~首先，你得有 helpers！MACO 实验简单分为几个步骤：麻醉 + 钝性分离 + 插线栓 +（拔栓）+ 缝合【如果需要 Reperfusion 则需要拔栓，否则直接缝合就行~】敲黑板！以上 5 个步骤都需要一个 helper，流水线操作，一只老鼠待在每个小伙伴儿面前不足 1 分钟，保证实验既快又有条 ...

做个生物实验也是够苦逼的啊，不止结果要好看光鲜，还要做定量…… 也是醉了。明明 western blot 结果做的那么漂亮，一眼就看出来差异了，还需要定量？！思量起来，这个也还算简单，忍了吧。。。but… 辛辛苦苦做的免疫组化（或荧光）也需要定量——你当搬砖就可以随便使唤了吗？花花绿绿，斑斑驳驳，肿么分析 ？还好，我有这本秘籍，一定要看完哦。 进入正题准备工作首先，你需要下载 imageJ，然后下载 IHC-Toolbox 插件，并放入 imageJ 的安装目录下的 plug ...

如果「Output Styles」中未出现「EndNote Export 」，就点击「Open Style Manager」，在打开的文本框中选中「EndNote Export」并确认. 之后「EndNote Export」就会出现在「Output Styles」中。3. 点击「File」，在下拉菜单中选中 「Export」。4. 在弹出的保存对话框的「文件名」中指定文件名，确认「保存类型」中的类型为「Text File ~undefined.txt)」，然后点击保存到目的文件夹中。（我保存到桌面中）5. ...

辛辛苦苦提完 RNA，逆转录后一个个孔加完引物和模板，最后进行 RT-PCR，你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了？等到一幅下面这样的结果图，不知道对于刚接触 RT-PCR 的你来说内心是否是崩溃的？这是啥？怎么看？别急，让我慢慢跟你介绍，看完后你就能准确的分析出你的 RT-PCR 结果了。（这里以 7500 软件为例进行介绍）1. 首先设置好内参和对照组（在 Analysis Settings 处），一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。如果 ...

元元上回用 targetscan 和 starbase 告诉大家查找 miRNA 结合位点，如何用数据库查找 miRNA 结合位点（今天学的是寻找基因的 3’UTR 和 miRNA 的碱基序列，最终预测 miRNA 与目标 mRNA 在 3’UTR 的结合位点）例如咱们在 starbase 看到如下结果：划红线的结果是 miR34A-5P 与 BCL2 存在结合位点，有三个数据库预测到这种关系。现在咱们用 RNA22Sites 这个网站也来寻找 miRNA 结合位点。进入这个网站：https://cm.jefferson. ...

相当多的蛋白质行使功能的时候并不是单打独斗的，蛋白质们通过蛋白质相互作用形成复合体然后进行工作，在工作的过程中，蛋白质们也可以通过更换相互作用的伙伴，从而改变蛋白质复合体的功能。因此，研究蛋白质的相互作用成为研究蛋白质功能和作用机制的最为重要的环节之一。另外，蛋白质相互作用的本质其实是三种力，氢键，分子间作用力（范德华力）和疏水力，因为这三种力的作用距离都非常的短，所以相互作用的蛋白我们通常认为它们必定相互接近 ...

今天给大家分享一篇 lncRNA 的文章（Self-Recognitionof an Inducible Host lncRNA by RIG-I Feedback Restricts Innate Immune Response），文章发表在 Cell 上，通讯作者为曹雪涛院士。RIG-I 是一种模式识别受体，它能够识别外源性病毒 RNA（dsRNA），之后 RIG-1 的半胱天冬酶募集结构域（CARD）通过 TRIM25 进行 K63 连接的泛素化。TRIM25 的 RING 和 SPRY 结构域介导其与 RIG-I 的相互作 ...

学霸君已经简要介绍了 Quantity One 蛋白定量的前两步——创建泳道和不同泳道的背景排除——如何正确使用 Quantity One 进行蛋白定量？接下来介绍创建条带、高斯建模与结果分析。 创建条带前面我们已经识别和分析了电泳图的泳道，下面我们开始讲电泳条带。在这里要明确两个名词：「Lane」 指电泳泳道，「Band」 指电泳条带。1. 电泳条带的识别：和前面的 Lane 一样，我们首先要对 Lane 上的 Band 进行识别。识别方式同样分为自动识别和人工识别。自动识别的 ...

代谢组学是现在医药领域用来探究某种疾病或药物作用机制的一种热门手段。目前代谢组学的研究主要采用三种技术平台：LC-MS、NMR 和 GC-MS。这三种技术各有利弊，相对来说，LC-MS 对于代谢物的检测最为全面。对于 LC-MS 代谢组学方法得到的代谢物指认，Xcalibur 软件和 Metlin 数据库最为实用。下面我们就讲一下 Xcalibur 软件和 Metlin 数据库的使用方法：1 . 找到想要解析的数据，双击，出现如下界面，激活右上角色谱图光标，使其变绿，即 ...

做肿瘤研究的人，很少有不知道 transwell 实验的，它是用来研究肿瘤细胞的迁移侵袭转移情况的一种简便快捷的实验方法，还可以构建两种细胞的共培养体系以及趋化性试验。今天咱们就来讲讲怎么做肿瘤细胞的侵袭转移实验。Transwell 侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上 ...