全部

转染是否成功的影响因素很多，如需要转染的细胞类型（对于困难的细胞系尤其如此），需要被转染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质），转染试剂等。但无论在何种情况下，转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个要素。细胞分裂细胞相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源 DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态；此外，还常用促有丝分裂刺激物（如，病毒转化，生长因子，条件培养基，以及滋养细胞）来活化原代培养细胞。贴壁细胞相比较悬浮细胞——在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异显著。相对于贴壁细胞（如 HEK，CHO），悬浮细胞（如 HL 60，Jurkat）非常难以转染，可能是因为细胞间膜结构的差异，但目前还没有分子水平上合理机制的解释。分板方案——在对培养细胞进行分板传代培养之前，必须把贴壁细胞用胰蛋白酶消化使之脱离培养基质。这个常规操作可导致正常细胞功能受到严重损害。因此分批方案的不同（如，胰蛋白酶消化时间的长短，胰蛋白酶的灭活等）需要优化。传代次数——传代次数是指对一个细

慢病毒（Lentiviral，LV）可将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久性表达，这一特性使其在科研与临床治疗（CART）中大放异彩。但在临床治疗中，外源基因的整合会带来插入突变的风险。这种情形下，研究者开始拓展非整合慢病毒的可能性。IDLV(Integration-deficient Lentiviral) 即整合缺陷型慢病毒，是通过在慢病毒整合酶中引入突变产生的非整合型慢病毒，「不整合」的特性使其更适合于静息细胞、临床治疗、干细胞研究等场景使用。与其他载体相比，其优势为：此外，IDLV 可在分裂细胞中瞬时表达，非分裂细胞中稳定表达；并且可与任何慢病毒载体配套使用，产生非整合型的慢病毒。IDLV 的应用场景IDLV 在应用中有什么优势呢？适用于哪些研究呢？ IDLV-CRISPR / Cas9高精准地进行基因编辑CRISPR / Cas9 是基因组编辑领域的明星技术，目前慢病毒载体（LV）是递送 CRISPR / Cas9 组分的重要手段，LV 可容纳大的 DNA 载荷并有效转导分裂和非分裂细胞，适用于绝大多数的科学研究。然而，持续表达的 CRISPR / Cas9 可能

腺相关病毒（AAV）作为一种安全、持久、高效、高特异性的基因操作工具，在生物学特别是神经生物学领域中被广泛使用。许多新手对于 AAV 的使用往往是知其然而不知其所以然。这篇短文将以图文结合的形式争取让大家在最短的时间内全面了解这种病毒工具。什么是AAV？野生型AAV 是一种复制缺陷型微小病毒，需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。而我们做实验用的是不需要辅助病毒的重组 AAV 病毒（rAAV）。将目的基因的 CDS 区序列或者 RNAi 干扰序列插入 rAAV 表达质粒中，包装病毒，然后直接使用 rAAV 感染细胞就能完成目的基因操作。什么时候用rAAV？当我们需要对特定基因进行过表达或干扰时，特别是做动物实验的时候，就可以使用rAAV 病毒。针对不同的实验需求，下表可以帮助您选择合适的病毒工具。rAAV 的优点是什么？安全性高：目前还没有发现AAV 对人体致病；每 10 个人中就有 8 个人在一生中会感染AAV，而rAAV更是去除了96% 的 AAV 基因组，进一步确保了安全性。目前唯一通过欧盟药监局的基因治疗药物 Glybera 也是一种 rAAV。免疫原性低：当AAV 用局部

一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 R

一般情况下，瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体，可在比稳定转染较短时间内（最多一周左右）收获转染的细胞，并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒，如果敲降用的是 siRNA（在 microRNA 实验中，过表达用的是 mimics，敲降用的是 inhibitor）。通过瞬时转染，将目的基因敲降或者过表达（gain and loss 实验），观察下游靶基因的表达情况，或者细胞表型（phenotype）的变化，例如凋亡，周期，增殖，侵袭，转移等。那该怎么做呢？一、准备lipofectamine2000（转染试剂）（避光），Opti-MEMI 减血清培养基（避光），目的基因的质粒或者 siRNA（以 siRNA 为例），细胞，六孔板，培养基，以及一些细胞实验所需的普通物品。二、步骤细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到 60%～80% 覆盖。细胞转染：一般六孔板液体每孔在

陈玲玲研究组长期致力于 lncRNA 代谢与功能的研究。前期通过 non-poly(A) 测序发现一类新型 lncRNA 家族，它们来自内含子，两端以 snoRNA 结尾，研究人员将其命名为 sno-lncRNA。SLERT 是其中一个 sno-lncRNA，完全定位在细胞核仁。核仁是细胞核内一个复杂且高度动态变化的无膜亚结构，是细胞核内核糖体 RNA（rRNA）的加工厂。它在调节 rRNA 的转录、加工以及核糖体亚基组装中发挥着重要作用。核仁在形态上由内而外可以分为三层结构：多个纤维中心（Fibrillar Center，FC）和致密纤维组分（Dense Fibrillar Component, DFC）形成球状结构镶嵌在颗粒区（Granular Component，GC）内。之前的研究表明 SLERT 直接结合核仁蛋白 DDX21 并调控其形成的环状结构的大小进而促进 RNA 聚合酶 I 转录。RNA 聚合酶 I 转录复合物聚集在 FC 区域边缘对核糖体 DNA（rDNA）进行转录；rRNA 前体（pre-rRNA）加工蛋白质在 DFC 区域参与调控 rRNA 前体的定向转运和核仁

当谈到氧气时，我们常常想到氧气的好处，以及缺氧的危害。但如果呼吸比地球大气中通常的含氧量（21%）更高的空气，会导致人和动物的器官损伤、癫痫发作，甚至死亡，尤其是当它超过身体的氧气需求时。例如，最近的研究表明，呼吸过多的补充氧气可能对心脏病患者和早产儿有害。同样，在阻塞性睡眠呼吸暂停中，呼吸暂停后突然增多的氧气已被证明是该疾病如何增加患者慢性健康问题风险的关键原因。尽管如此，这些效应的机制仍然模糊不清。许多研究人员认为活性氧——具有较高反应活性的氧的代谢产物或衍生物，可能在高氧条件中发挥作用，破坏我们的基因组和我们细胞中的许多分子，但几乎没有证据表明过量的氧气如何影响特定的酶和途径。今日，格莱斯顿研究所的研究团队发表在Molecular Cell上的一篇研究Oxygen Toxicity Causes Cyclic Damage by Destabilizing Specific Fe-S Cluster-Containing Protein Complexes，发现了过量的氧气如何改变我们细胞中含有铁和硫的少数蛋白质——这是一种类似于铁生锈的化学过程。反过来，这些 「生锈」的蛋白质会

常言道，喝点小酒莫喝醉，少点熬夜早点睡，尽力活到 100 岁。为个人健康着想，喝酒应适量且节制，但生活中难免有人喝得酩酊大醉，甚至喝酒误事，酒后失态，给自己和他人带来无穷无尽的麻烦。成熟水果和花蜜中单糖自然发酵产生的乙醇消耗会导致中毒，损害活动能力和判断力，因此食用果糖和其他单糖的动物已经进化出肝酶来分解乙醇。在最新的研究中，研究人员又发现了一种新的醒酒分子——成纤维细胞生长因子 21（FGF21）。2023 年 3 月 7 日，德州大学西南医学中心Steven A. Kliewer团队在CellMetabolism杂志发表研究论文FGF21 counteracts alcohol intoxication by activatingthe noradrenergic nervous system，发现一种名为 FGF21 的激素可以保护小鼠免受醉酒引起的平衡丧失和纠正反射。利用 FGF21 给药进一步加速了醉酒后的恢复，FGF21 通过激活去甲肾上腺素能神经系统来发挥其清醒作用和警觉性，进而抵消酒精中毒等负面影响。图 1 来源：CellMetabolism研究内容FGF21 是一种由

据中国人口数据老龄化分析，截至 2021 年底，全国 65 岁及以上人口已突破 2 亿，比上年增加 334 万人，占总人口的 14.2%。人口老龄化是全球性问题，为了改善老年人群的生活质量和福祉，「积极老龄化」概念正在盛行。人类作为群居动物，社交环境深刻着生活的满意度和幸福感。既往已有大量研究表明，社交活动有助于老年人群的身心健康，但这些研究大多在西方人群中开展，而对于亚洲老年人参与社会活动与健康结果之间的关联，人们知之甚少。为了填补这一知识空白，四川大学华西医院的何森团队探索了社交频率与中国老年人群体的总体生存的关联，并以Association between social activity frequency and overall survival in older people: results from the Chinese Longitudinal Healthy Longevity Survey为题发表在 BMJ 子刊Journal of Epidemiology & Community Health上。该研究重点探讨了社交活动频率与中国老年人群寿命的关系，发现

适应性产热是指棕色脂肪组织和米色脂肪细胞响应外部刺激（例如寒冷暴露和运动等）产生热量【1】。由于其具有增加能量消耗的巨大能力，激活机体适应性产热已成为对抗全球肥胖及其相关疾病（如 2 型糖尿病和胰岛素抵抗等）的重要策略。研究表明交感神经元能通过释放儿茶酚胺激活脂肪细胞的产热程序【2】。然而，产热脂肪细胞反向调控交感神经投射的潜在机制并不清楚，因此无法建立起其相互作用的调控网络。2023 年 3 月 6 日，上海同济大学医学院、同济大学附属同济医院栾冰教授团队在Nature Metabolism杂志上发表题为Thermogenic adipocyte-derived Zinc promotes sympathetic innervation in male mice的研究成果。该研究报道了产热脂肪细胞可分泌锌离子作为脂肪因子激活交感神经的活性，进一步促进脂肪组织的适应性产热，为肥胖的治疗提供了新的理论基础。首先，研究人员使用白喉毒素清除脂肪组织中的 UCP1 阳性产热脂肪细胞后发现，交感神经对脂肪组织的支配程度大幅下降，这表明产热细胞能够促进交感神经轴突生长。为进一步揭示产热细胞调控交感

本周学术君继续带来 CNS 最新进展，助力大家勇攀科研高峰。1.Nature：揭示生命演化动力遗传突变率大小影响着物种长远的演化能力。2023 年 3 月 1 日，浙江大学的张国捷团队在Nature杂志发表研究论文Evolution of the germline mutation rate across vertebrates。该研究通过跨物种的比较分析和调查物种间的生活史特征的差异对突变率，证明当物种有效种群规模越大，每一代新突变的产生速率就越低，揭示了不同物种胚系突变率差异的根本原因和演化规律。图 1：来源Nature2.Science：USB1 能够修饰 miRNA 来调控造血发育USB1 介导的嗜中性白血球减少症（PN）是一种奇异的皮癣常染色体隐性骨髓衰竭（BMF）综合征，其机制不明。2023 年 3 月 3 日，美国华盛顿大学的Luis Francisco Zirnberger Batista联合科罗拉多大学博尔德分校的Andre Levchenko教授在Science杂志发表研究论文USB1 is a miRNA deadenylase that regulates he

既往有研究表明，睡眠规律性或与心血管疾病发生相关，但睡眠规律是否与动脉粥样硬化之间存在关联尚且缺乏相关研究。近日，《美国心脏协会杂志》有研究表明，睡眠不规律会增加动脉粥样硬化的患病风险。动脉粥样硬化表现为脂肪沉积物在动脉壁上堆积，继而导致动脉变窄和血流量减少，影响氧气和其他营养物质到达身体各处；严重情况下甚至会形成阻塞动脉的血块，继而引发冠心病、心肌梗死和心源性猝死等高风险疾病。2023 年 2 月 15 日，一项题为Sleep Irregularity and Subclinical Markers of Cardiovascular Disease: The Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis的新研究发表在《美国心脏协会杂志》（JAHA）上，研究发现，与睡眠习惯更规律的人群相比，睡眠不规律者罹患动脉粥样硬化的风险更高（图 1）。图 1 JAHA 研究（图源：[1]）这项动脉粥样硬化多种族研究（Multi- Ethnic Study of Atherosclerosis, MESA）共从美国六个大型社区招募 2032 位成年人，平均年龄为 68

心血管疾病是全球的主要死因。2019 年，共有 1790 万人死于心血管疾病，占全球死亡总数的 31%。在心血管死亡事件中，85% 人群死于心脏病和中风。据多项研究表明，身体活动，尤其是中等强度运动，可降低心血管疾病和癌症的患病风险。英国国家医疗服务体系 NHS 曾建议，成年人每周应进行至少 150 分钟的中强度活动或 75 分钟的高强度活动。近日，有新研究表明，如果你坚持不了那么久，适度的中度运动也可达到保健预防的效果。2023 年 2 月 28 日，剑桥大学临床医学院在BritishJournalofSportsMedicine发表题为Non-occupational physical activity and risk of cardiovascular disease, cancer and mortality outcomes: a dose–response meta-analysis of large prospective studies的研究，他们发现适度运动可以降低早期死亡风险。具体而言，每天坚持 11 分钟的快步，便可显著降低心脏病、中风和癌症等患病风险。图 1

导读你是否曾经因为焦虑而感到心跳加速？这种心动过速是焦虑的主要症状之一，可能非常强烈，以至于患者有时会误以为是心脏病发作。前期的研究揭示了许多将信号从大脑传递到心脏的途径，但是心率是否会反过来对情绪造成影响这一问题，已经在临床精神病学和基础神经科学领域争论了近一个世纪。2023 年 3 月 2 日，来自斯坦福大学的研究团队在国际顶尖期刊Nature发表了题为Cardiogenic control of affective behavioural state的文章，在该研究中，他们证实心率增加与小鼠焦虑相关行为的增加有关，证明了来自身体的信号如何影响与焦虑和恐惧等情绪相关的情感行为。他们开发了一种非侵入性光遗传起搏器，能够在自由活动的小鼠中精确地针对特定细胞类型来控制心率，最高可达每分钟 900 次（基线心率为 660 次/分钟）。借助该技术，他们发现，心跳加速也会与大脑「对话」，导致与焦虑相关的行为，并精确定位了相关的大脑区域。图片来源：Nature主要研究内容无创光遗传的心脏节律控制首先，研究人员在小鼠心肌肌钙蛋白 T 启动子（mTNT）的控制下将 ChRmine 转染到基因组，以实

背景肺癌是世界上死亡率最高的癌症之一，但早期诊断有助于提高治愈率，降低死亡率。 低剂量 CT 筛查是针对高危人群的有效肺癌筛查计划，但其成本和电离辐射使其无法实现大范围普查；挥发性组学方法，特别是呼气挥发性有机化合物 (VOCs) 指纹分析，由于其方便、无创且耐受性好，在早期肺癌筛查中的应用受到强烈关注。然而，呼气成分中的痕量 VOCs 疾病标记物的精准定量筛查方法目前仍无法满足临床要求。主要研究内容在本研究中，研究团队首次系统完整地建立了基于 LC-MS/MS 的从呼气采集、预处理到代谢分析的标准定量分析方法，并建立了可以应用于早期肺癌筛查的标记物组合和阈值。标准的呼气采集方法，实现了对呼气成分不同食物和器官来源的区分；采用羰基衍生化方法的固相定量萃取过程，实现了气相样品到定量稳定可控的液相样品的转换；采用液相色谱串联三重四级杆质谱方法对液相衍生呼气样品进行检测，与目前的临床定量方法完全一致，且大幅提高定性结果的敏感性和可靠性。检测对象为人体呼气中 25 种具有稳定衍生化反应和 LC-MS/MS 分析方法的小分子羰基 VOCs，4 种羰基 VOCs 无法检测且未显示。除了寻找癌症患者

博士生和科研人员如何培养科研职业发展技能

英文科研论文高效指南：标题和摘要写作要点

如何有效撰写 SCI 英文科研论文

在用英语进行学术论文写作时，往往需要考虑动词时态问题。如果时态使用不恰当或有误，可能影响科研信息的准确传达。然而，在学术写作中，对时态的正确使用并非一件十分简单的事。有些时候，作者可能相对容易判断出在某个句子中使用何种时态是正确的；但更多情况下，需要结合具体语境、语意，来仔细揣摩使用哪种时态更为恰当、准确。为了便于读者理解，本文将以举例的方式，由浅入深地介绍论文写作中的几种常用时态。1、一般现在时（Present Tense）① 用于陈述事实现在时一般用于表达事实陈述或一般真理。例：DNA is composed of four nucleotides. (DNA 是由四种核苷酸组成的。)② 用于介绍当前论文中的要素一般现在时普遍用于指本论文的内部要素（例如，图、表、方程式、部分、章节，等）。例：Figure 1 shows a typical X-ray diffraction pattern of MgB2 taken at room temperature. (图 1 显示了室温下 MgB2 的典型 X 射线衍射图案。)The data are the means ± SEs o

基金资助的评审标准相当严格，且评审过程需要花费一定时间，而资助机会往往有限且竞争激烈。为了更好地帮助广大科研人员顺利申请到实验经费，小编这里为大家精心整理了六大实用建议，在准备和撰写基金申请书的过程中助您一臂之力！1、有的放矢——了解资助机构的要求在决定进行基金项目申请之前，需仔细阅读申请须知、审核流程等指南和说明。尽可能多地了解资助机构及其资助审查程序，以便根据其具体要求来撰写基金项目申请书。不同基金资助机构的评审标准不尽相同，在遴选资助项目时也可能有一定倾向和偏好。通过仔细阅读申请指南和要求，选择适合自己的基金项目进行申请；在撰写申请书时，对自己研究项目的描述和表达尽可能符合基金资助机构的使命和要求。这样可以增加成功获得基金资助的可能性。2、脱颖而出——突出项目的新颖性和重要性诸如国家自然科学基金项目等的申请，竞争还是相当激烈的。要知道，基金评审专家面前是大量需要评审的项目提案，因此，他们会首先通过摘要——这类浓缩了整个申请书主要内容的部分，来对整个项目申请进行快速衡量。那么，让自己的申请书在众多竞争者中脱颖而出，成功吸引评审专家的注意，就显得尤为重要。在摘要乃至整个申请书中，应突