【资源】有关核蛋白提取液配制的问题
丁香园论坛
2041
我是第一次进行核蛋白提取，从文献上查到细胞裂解液和细胞核裂解液的配方如下
细胞裂解液A液配方为：
1 10mmol/L的Hepes（PH 7.9）
2 10mmol/L KCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 0.2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 0.1mmol/L EGTA
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
配置细胞核裂解液B液方案：
1 20mmol/L的Hepe（PH 7.9）
2 420mmol/L NaCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 20%甘油
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
9 5ug/ml Aprotinin
10 5ug/ml Pepstatin
11 5ug/ml Leupeptin）
现在有以下几个问题：1.我没有购买到Igepal这个试剂，改用NP-40可以吗？浓度需要调整吗？
2.PMSF是需要在临用前加吗？还是可以直接将A液和B液全部按照配方配好保存呢？如果能够保存，保存的环境什么讲究吗？
3.我在预备A液的过程中发现PMSF比较难溶解，似乎还有其他一些成分没有完全溶解，通过搅拌或者加热都没有溶解完全，请问有没有其他人碰到类似问题？有没有好的办法可以解决？
由于本人是第一次接触这个领域，还请各位大虾多多指教！如果能够把A液和B液的各成分主要作用讲解一下的话本人更是不胜感激！
细胞裂解液A液配方为：
1 10mmol/L的Hepes（PH 7.9）
2 10mmol/L KCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 0.2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 0.1mmol/L EGTA
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
配置细胞核裂解液B液方案：
1 20mmol/L的Hepe（PH 7.9）
2 420mmol/L NaCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 20%甘油
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
9 5ug/ml Aprotinin
10 5ug/ml Pepstatin
11 5ug/ml Leupeptin）
现在有以下几个问题：1.我没有购买到Igepal这个试剂，改用NP-40可以吗？浓度需要调整吗？
2.PMSF是需要在临用前加吗？还是可以直接将A液和B液全部按照配方配好保存呢？如果能够保存，保存的环境什么讲究吗？
3.我在预备A液的过程中发现PMSF比较难溶解，似乎还有其他一些成分没有完全溶解，通过搅拌或者加热都没有溶解完全，请问有没有其他人碰到类似问题？有没有好的办法可以解决？
由于本人是第一次接触这个领域，还请各位大虾多多指教！如果能够把A液和B液的各成分主要作用讲解一下的话本人更是不胜感激！
