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        【资源】电泳相关溶液配制==2D 双向凝胶电泳

        丁香园论坛

        2790
        1、 水化上样缓冲液( I ) :
        尿素 8M 4.805g
        CHAPS 4% 0.4g
        DTT 65mM 0.098g (现加)
        Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l ( 40% )(现加)
        溴酚蓝 0.001% 10 m l ( 1% 溴酚蓝)
        MilliQ 水 定容至 10ml
        分装成 10 小管,每小管 1ml , -20 ℃冰箱保存。

        2、水化上样缓冲液( II ):
        尿素 7M 4.2g
        硫脲 2M 1.52g
        CHAPS 4% 0.4g
        DTT 65mM 0.098g (现加)
        Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l ( 40% )(现加)
        溴酚蓝 0.001% 10 m l ( 1% 溴酚蓝)
        MilliQ 水 定容至 10ml
        分装成 10 小管,每小管 1ml , -20 ℃冰箱保存。

        3、水化上样缓冲液( III ) :
        尿素 5M 3.0g
        硫脲 2M 1.52g
        CHAPS 2% 0.2g
        SB 3-10 2% 0.2g
        DTT 65mM 0.098g (现加)
        Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l ( 40% )(现加)
        溴酚蓝 0.001% 10 m l ( 1% 溴酚蓝)
        MilliQ 水 定容至 10ml
        分装成 10 小管,每小管 1ml , -20 ℃冰箱保存。

        4、胶条平衡缓冲液母液 :
        尿素 6M 36g
        SDS 2% 2g
        Tris-HCl 0.375M pH8.8 25ml ( 1.5M pH8.8 Tris-HCl )
        甘油 20% 20ml
        MilliQ 水 定容至 100ml
        分装成 10 管,每管 10ml , -20 ℃冰箱保存。

        5、胶条平衡缓冲液 I :
        胶条平衡缓冲液母液 10ml
        DTT 0.2g
        充分混匀,用时现配。

        6、胶条平衡缓冲液 II :
        胶条平衡缓冲液母液 10ml
        碘乙酰胺 0.25g
        充分混匀,用时现配。

        7、低熔点琼脂糖封胶液 :
        低熔点琼脂糖 0.5% 0.5g
        Tris 25mM 0.303g
        甘氨酸 192mM 1.44g
        SDS 0.1% 1ml ( 10% SDS )
        溴酚蓝 0.001% 100 m l ( 1% 溴酚蓝)
        MilliQ 水 定容至 100ml
        加热溶解至澄清,室温保存。

        8、30% 聚丙烯酰胺贮液 :
        丙烯酰胺 150g
        甲叉双丙烯酰胺 4g
        MilliQ 水 500ml
        滤纸过滤后,棕色瓶 4 ℃冰箱保存。

        9、 1.5mol/L Tris 碱 pH8.8 :
        Tris 碱 90.75g
        MilliQ 水 400ml
        用 1mol/L HCl 调 pH 至 8.8 ,加 MilliQ 水定容至 500ml 。 4 ℃冰箱保存。
        9、10% SDS :
        SDS 10g
        MilliQ 水 100ml
        混匀后,室温保存。

        10、 10% Ap :过硫酸铵
        Ap 0.1g
        MilliQ 水 1ml (用时加水溶解)
        溶解后, 4 ℃冰箱保存。

        11、 10 ×电泳缓冲液: ( 1 × = 25mM Tris , 192mM glycine , 0.1% SDS , pH8.3 )
        Tris 碱 30g
        甘氨酸 144g
        SDS 10g
        MilliQ 水 1L
        混匀后,室温保存。
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