原位双膜法快速检测Pichia酵母系统阳性表达株

1） 将醋酸纤维素薄膜置于MD/His -平板的His + 转化子菌落上,用涂布棒轻压使醋酸纤维素薄膜完全湿润并赶尽气泡, 使所有菌落转移到醋酸纤维素薄膜上.
2) 在BMMY板上置一同样大小的硝酸纤维素薄膜, 并将醋酸纤维素薄膜菌落向上置于硝酸纤维素薄膜上. 30 ℃孵育18 h 后, 将醋酸纤维素薄膜移至MDP2His 平板上, 4 ℃保存
3) 将硝酸纤维素薄膜取下, 6 %小牛血清37 ℃封闭2 h , TBS-T ( Tris-NaCl 缓冲液加0105 %吐温20) 洗3 次( 每次10 min) . 加一抗室温孵育2 h , TBS－T 洗膜3 次. 然后二抗室温孵育2 h , TBS2T 洗膜3 次. 最后显色
这时，你可以看到强弱不等的颜色，挑选染色最强的克隆，做诱导表达进一步验证
操作时，一定要记好位置，以免不能将膜上的克隆和板上的克隆对上。