Hoechst 33258染色
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Hoechst 33258染色
1．原理
Hoechst 33258和Hoechst 33342均为非嵌人性荧光染料。它们在活细胞中 DNA聚AT序列富集区域的小沟处与DNA结合。
活细胞或固定细胞均可从低浓度溶液中 摄取该染料。从而使细胞核着色。故又把此类染料称为DNA探针。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechsr-DNA的激发和发射波长分别550nm和460nm。在荧光显微镜紫外光激发时，Hoechst-DNA发出亮蓝色荧光。
2．溶液的配制
(1)Hoechst 33258储存液
Hoechst 33258 lmg
0．01mol／LPBS(pH 7．4) 5ml
(2)Hoechst 33258工作液(终浓度为0．5ug／ml)
Hoechst 33258浓缩液 125ul
0．01mol／LPBS(pH 7．4) 50ml
3．操作程序
(1)细胞悬液或培养单层细胞等标本，用醋酸―乙醇或Carnoy固定液固定；
(2)0．01mol／LPBS漂洗5分钟；
(3)Hoechst 33258工作液染色，室温15分钟；
(4)0．01mol／LPBS漂洗3次，每次5分钟；
(5)用甘油与PBS比例为1：9的混合液或水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察。
结果：该染料为DNA的特异性荧光探针，细胞核呈亮蓝色荧光
