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        Hirt法快速提取腺病毒DNA

        互联网

        2717

        取腺病毒以m.o.i=5病毒量感染293细胞,待细胞病变达+++~++++时收获。
        沉淀细胞加2m1 TE重悬,分装四个1.5ml Eppendorf管,
        每管加蛋白酶K(20μg/μl)7μl和10% SDS 50μl,37 C孵育1 h,
        再加5mol/L NaCI 150μl置于4℃反应2ho 13,000rpm离心30min,
        转移上清,用等体积酚、酚一氯仿/异戊醇、氯仿/异戊醇各抽提一次,
        抽提上清加入1/10体积2.5mol/L的乙酸钠(pH5.2)和2倍体积无水乙醇,置-20℃ 30min或O/N。
        13,000rpm离心l0min弃上清,
        75%乙醇洗两遍,于室温晾干后,每个1.5m1 Eppendorf管加50μl TE溶解。

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