• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        用Hirt法提取法抽提染色体外游离DNA

        互联网

        4864

         

        病毒感染宿主细胞后常常存在一些非整合的线形或环状双链DNA分子,通常称为赫特(Hirt)DNA。

        下面是一个试剂盒的步骤:

        GENMED 赫特(HIRT)法病毒DNA 纯化试剂盒

        1. 准备 个 孔细胞培养板的细胞(不同试剂盒的具体用量不一,说明书中有具体流程)
        2. 抽掉 孔细胞培养板里的 孔培养液
        3. 轻轻沿壁加入 毫升GENMED 清理液(Reagent A),清洗生长的细胞表面
        4. 小心抽掉清理液
        5. 加入 微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面
        6. 放进 ℃培养箱孵育 分种
        7. 手击振动培养瓶,使细胞脱落,然后加入 毫升用户自备的完全细胞培养液
        8. 移入 毫升离心管
        9. 放进微型台式离心机离心 秒,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415)
        10.小心抽去上清液
        11.加入 微升GENMED 赫特液(Reagent B),混匀
        12.加入 微升GENMED 酶解液(Reagent C),轻轻混匀
        13.放进 ℃恒温水槽孵育小时
        14.加入 微升GENMED 盐析液(Reagent D)
        15.放进 ℃冰箱里孵育 小时或过夜
        16.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415)
        17.移出 微升上清液到新的毫升离心管
        18.加入 微升GENMED 抑酶剂(Reagent E)
        19.放进 ℃恒温水槽孵育分钟
        20.移出 微升(二分之一内容物)到另一个新的毫升离心管
        21.分别加入 微升GENMED 萃取液(Reagent F)
        22.涡旋震荡仪上强烈震荡秒
        23.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415)
        24.分别移出上层液相溶液到新的毫升离心管,留下 微升相位交界面的溶液
        25.分别加入 微升GENMED 浓缩液(Reagent G)
        26.分别加入 毫升GENMED 沉淀液(Reagent H)
        27.涡旋震荡仪上强烈震荡秒
        28.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415)
        29.小心抽掉上清液
        30.分别加入 毫升GENMED 净化液(Reagent I)
        31.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415)
        32.小心抽掉上清液
        33.空气中晾干
        34.分别加入 微升GENMED 溶解液(Reagent J)
        35.合并 管为 管离心管

         

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序