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        PriCells: 正常人羊膜细胞(HAM)原代细胞培养

        互联网

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        实验材料:

        1. 人胎盘;

        2. PBSA/GASP:含抗生素的PBSA(庆大霉素,50μg/ml;两性霉素B,1.25μg/ml;链霉素100μg/ml;青霉素100U/ml);

        3. 丙三醇;

        4. 含50%丙三醇的DMEM;

        5. 胰蛋白酶/EDTA;

        6. Millicell微孔膜组织培养插片;

        7. 塑料刮片和无菌棉拭子;

        实验方法:

        1. 用PBSA/GASP清洗组织;

        2. 分离人羊膜,用戴手套的手从胎盘上将羊膜钝性分离下来,分离出的羊膜薄层包括上皮细胞,基底膜和一些基质组织;

        3. 用无菌棉拭子除去基底膜下的基质组织,使分离的羊膜尽可能的薄;

        4. 在监测供者血清以除外疾病的时期,可以将粗分离出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放;

        5. 临用前解冻人羊膜,用PBSA清洗后将其切成直径约为2mm的小块;

        6. 用胰蛋白酶/EDTA消化组织块,37℃,30min;

        7. 用塑料刮片轻刮消化过的人羊膜,除去上皮细胞,注意不要破坏基底膜;

        8. 用PBSA清洗裸露的羊膜,并将它的基底膜面(去除上皮细胞的面)黏附在Millicell微孔膜组织培养插片上;

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