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        Random Prime Labeling of DNA随机引物法标记DNA【Harvard University】

        互联网

        1894

        Cepko/Tabin Lab ,Harvard University http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/R1.html

        Protocol R.1

        Random Prime Labeling of DNA

        Solutions

        Buffer A

        1.25 M Tris 8.0 625 ml 2M Tris 8.0 2 125 ml 1M MgCl2

        0.5 mM dGTP 5

        0.5 mM dTTP 5

        222

        18

        Buffer B

        2 M HEPES pH 6.6

        Buffer C

        135

        165

        Random Hexamer Mix (10 mg/ml)

        50 OD units random hexamer (Pharmacia 27-2166-01)

        250

        ABC Buffer

        10

        25

        15

        Procedure

        • Boil 1

        • Add the following: 24

        4

        1

        5

        5

        Incubate at room temperature for 1 hour.

        • Phenol/chloroform extract and ethanol precipitate with 0.5 volumes NH

        • Wash with 80% EtOH and dry.Remove unincorporated nucleotides with a NENSORB column (see Protocol S.5).

        ml 100 mM dGTP ml 100 mM dTTP ml Q ml b ME ml Random Hexamer Mix ml TE ml Q ml Buffer A ml Buffer B ml Buffer C ml (0.5 m g)probe in 11 ml Q for 5 minutes and immediately place on ice for 5 minutes.ml ABC Buffer ml BSA (10 mg/ml)ml Klenow ml a 32 P dCTP ml a 32 P dATP4OAc.

        0.125 M MgCl2

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