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        请高手帮忙设计引物,非常感谢!

        丁香园论坛

        912
        我需要设计引物,将两条片段用45bp的linker连起来, 并且在片段2的3’端加上30个bp 的tag和两个酶切位点,我已经被困惑了很长时间,希望有高手帮帮忙,非常感谢!
        片段1:
        5’ACCATGGCTGTCTTGGGGCTGCTCTTCTGCCTGGTGACATTCCCAAGCTGTGTCCTATCCCAGGTGCAGCTGAAGCAGTCAGGACCTGGCCTAGTGCAGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACCTGCACAGTCTCTGGTTTCTCATTAACTAACTATGGTGTACACTGGGTTCGCCAGTCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTGATATGGAGTGGTGGAAACACAGACTATAATACACCTTTCACATCCAGACTGAGCATCAACAAGGACAATTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTTAAAATGAACAGTCTGCAATCTAATGACACAGCCATATATTACTGTGCCAGAGCCCTCACCTACTATGATTACGAGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 3’
        片段2:
        5’GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGTCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATTGGCACAAACATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTAGCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAATAATAACTGGCCAACCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGT 3’
        linker: 5’ggtggcggtggctccggcggtggtgggtcgggtggcggcggatct3’
        在片段2的3’端要加上tag, 序列为: 5’gagcagaaactcatctctgaagaggatctg3’ 其序列可以被其简并密码子取代. 在tag后有两个酶切位点,Xhol1和Not1
        全长为:
        5’ 片段1----linker-----片段2---tag—Xhol1—Not1 3’
        请高手帮忙,谢谢!
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