利用PCR引物点突变

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

步骤

1. 制备模板（见基本方案，步骤1和2）

2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。

3. 扩增模板DNA（基本方案，步骤4和5），在最后一次延伸结束后，加5 U 的klenow酶，30℃保温15 min。

4. 分析并处理反应产物（基本方案1，步骤6和7）。

5. 取所得扩增片段的一半量用侧翼序列内的限制性内切酶切割，低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化酶切片段。

6. 将两个扩增的片段通过平末端连接亚克隆入合适的载体。

7. 按基本方案1，步骤10、11进行。

常见问题

利用PCR引物点突变

来源：丁香实验

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