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    利用PCR引物点突变

    相关实验：定点诱变实验

    最新修订时间：

    材料与仪器

    试剂、试剂盒
    限制性内切酶klenowDNA聚合酶
    仪器、耗材
    水浴锅离心机培养箱

    步骤

    1.  制备模板（见基本方案，步骤1和2）
     
    2.  合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。
     
    3.  扩增模板DNA（基本方案，步骤4和5），在最后一次延伸结束后，加5 U 的klenow酶，30℃保温15 min。

    4.  分析并处理反应产物（基本方案1，步骤6和7）。

    5.  取所得扩增片段的一半量用侧翼序列内的限制性内切酶切割，低熔点琼脂糖凝胶电泳 纯化酶切片段。
     
    6.  将两个扩增的片段通过平末端连接亚克隆入合适的载体。

    7.  按基本方案1，步骤10、11进行。
     

    常见问题



    来源：丁香实验

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