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        噬菌体电镜

        相关实验:噬菌体的检查及效价测定

        user-title

        dxy_gb7z2nh5

        有友友做过噬菌体电镜吗?我想问制备样本需要用醛类溶液灭活吗?有具体的方法吗?第一次做噬菌体,在文献找的方法都很模糊

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        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

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        需要进行醛类灭活,可以使用邻苯二甲醛

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        1、收集培养好的新鲜菌体,用1×PBS(pH7.0)或0.9%NaCl漂洗样品2-3 次,每次15min,5000rpm离心3min,去上清。

        2、加2.5%的戊二醛溶液1ml,轻摇充分混匀,重悬菌液,4℃固定4h或过夜

        3、5000rpm离心3min后去上清,加入500ul PBS漂洗样品三次,每次15min (可用枪轻轻吹打,然后离心再加入新鲜PBS,混匀离心)

        4、加1%俄酸500ul或适量,摇动充分混匀,固定1-2h∶

        5、5000rpm离心3min,去上清,加入PBS500ul漂洗样品三次,每次15min;

        6、用梯度浓度(包括20%,50%,80%,100%五种浓度)的乙醇溶液脱水,每种浓度处理10min,5000rpm离心3min∶

        7、用纯丙酮或100%叔丁醇转换100%乙醇2-3次,即乙醇菌液离心的后,去上清,加200ul纯丙酮4℃放置20-30min,5000rpm离心3min,再加入新鲜纯丙酮。


        8、自然风干,密封4℃保存,等待上样。

        user-title

        sswei

        有帮助

        制备样本过程中需要用醛类溶液灭活。

        user-title

        loveliufudan

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        噬菌体电镜样品制备的确切方法可能会因实验目的、噬菌体类型和实验室的惯例而有所不同。以下是一种常见的噬菌体电镜样品制备方法,其中包括醛类溶液的使用:

        1. 噬菌体培养和扩增:首先,培养和扩增所需的噬菌体株,使用适当的培养基和条件。噬菌体扩增通常需要使用感染宿主细菌进行感染。

        2. 噬菌体精炼:将培养液通过低速离心等方式进行精炼,以去除细菌细胞和其他细胞碎片。这样可以获取相对纯净的噬菌体悬液。

        3. 醛固定:为了固定噬菌体样本,一般会使用醛类溶液。常见的醛类溶液包括2.5%至4%的戊二醛(glutaraldehyde)或2%的甲醛(formaldehyde)。选择适当的醛类溶液浓度取决于实验需求和噬菌体的特性。固定时间一般为30分钟至1小时。

        4. 洗涤:固定噬菌体后,用缓冲液或PBS(磷酸盐缓冲液)等洗涤样本,以去除多余的固定剂。

        5. 后续处理:根据需要,可以进行进一步的样品处理步骤,如后续固定、去水化和染色等。


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