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        逆转录的怪问题

        互联网

        1797

        ouyangty247:我正在做rt-pcr,奇怪的是,我用的同一支RNA,同时逆转录好几管,所有的东西都是预混好再分装的。

        PCR时,除cDNA外所有的东西也都是预混好再分装的,引物用的是GAPDH,再分别加入先前RT得到的cDNA,按理说不应该都是一样的么?可是跑胶后却发现有的有条带,有的就没有。做了好几次都是这样,为什么???太奇怪了!

        我做的头都大了,不知道到底是哪出了问题,恳请大家多多帮忙!

        丁香园网友yangbinxia认为:

        如果你加的试剂都充分混匀尤其加前也要先混匀再取出的话,是不是你的PCR仪出了问题,PCR仪孔里不干净的话它的温度反应就不灵敏了,就可能出现你的情况,你可以拿酒精把孔擦一擦或还一台PCR仪试试看;有人说PCR就像魔鬼,你过一段时间再做的话一切又都正常了,我也遇到你的情况,最后象恶性循环一样什么都P不出来,放了一段时间再拿原来东西重作一切都正常了,很奇怪。

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