小鼠淋巴结单细胞悬液制备及注意事项

小鼠淋巴结单细胞悬液制备流程

1. 将小鼠颈椎脱臼处死，75% 酒精浸泡 5min，取出小鼠，腹部朝上置于无菌操作台上。
2. 用剪子从胸骨起沿正中线一直到颌下将皮肤剪开，再从颌下向左右耳根的方向切开皮肤。用镊子夹着皮肤向左右掀开并用针固定，即可见到胸骨上方的一对体积较大的颌下腺。在左右颌下腺各自的上缘，附着有黄色的颈前部淋巴结。剪断胸锁乳突肌和肌腹，并掀起它们两个断端，可见到左颌下腺背侧深部左、右各有一个小的颈深部淋巴结。用镊子和眼科小剪仔细将淋巴结摘除。
3. 取出淋巴结，并浸泡于干净的 PBS 溶液中。
4. 用无菌的 2.5mL注射器吸取培养液，左手用镊子夹持淋巴结，右手持注射器，小心插入淋巴结中吹打，至淋巴结细胞完全被吹打干净，观察只剩余白色的结缔组织和脂肪组织为止。
5. 将吹打出来的胸腺细胞用 200 目筛网过滤，收集于 15mL 离心管，300g 离心 5min，弃上清。
6. 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞，计数，并调整细胞浓度至 1×10⁷/mL。

   注意事项：

   1. 颈部淋巴结

   颈浅部淋巴结位于左右颌下腺之浅表和外侧，常为脂肪组织所包绕，呈卵圆形。颈深部淋巴结位于左右胸乳突肌和锁乳突肌腹侧的深处，舌骨下方肌肉群的外侧，即颌下腹背深处，略近扁珠形。摘除时，如急性实验可先行穿刺股动脉，颈动脉切断放血，避免手术时出血难以观察淋巴结位置。

   1. 腋窝淋巴结

   位于左右腋窝脂肪组织之内。呈梨形，沿胸骨剪断胸部肌肉，掀向外上方，剥开腋窝部脂肪组织，可以寻得这一对体积较大的淋巴结。

   1. 臂淋巴结

   位于浅层皮下结缔组织之中，紧贴左右侧肱二头肌肌腹，呈卵圆形，可由腋窝部向外沿肩胛下肌寻找。

   1. 胸内淋巴结

   这个部位的淋巴结近圆形，其数目和部位分布的变化较大，一般可以在下述几处观察到淋巴结：即胸腺背侧偏外方的脂肪组织中，气管以及气管分支处的后方。摘取时，用剪子将胸骨剪断，将胸腔左右打开，露出位于心脏上方的左右胸腺。在左右两叶胸腺的里侧，支气管分支部相对应处，附着有3、4个胸腺淋巴结。因为颜色与白色的胸腺相似，摘取时需加注意。

   1. 腹股沟部淋巴结

   近乎肾形，浅居左和右臀肌深部的一个陷窝之中，其头端是坐骨神经的发出部。从最前端剪断腰背部肌肉群，剥开其浅层，逐渐向尾端掀起，可以找到该对淋巴结。由于这一对淋巴结体积较小，若不慎搅乱了它们的局部关系，不易重新找到。

   1. 胰部淋巴结

   为紧贴的近乎球形的一对，中间有腹腔血管穿过，位居左右肾脏内侧缘和腹主动脉之间，近肾上腺之尾侧端。将肾脏向内侧翻起，剥开脂肪组织，即可在不破损腹内大血管的情况下取得肾门部淋巴结。摘取时，左淋巴结附着在肾动脉、肾静脉的腹侧，可以很容易摘出，而右淋巴结位于肾动脉、肾静脉的背侧，看不见也不好摘出。因此，可把右肾向左肾方向翻，就可看到右淋巴结附在腹主动脉附近，可以很容易地摘出。

   1. 肠系膜淋巴结

   这是小鼠全身各部位淋巴结中最大，最易于寻找的一个，形如蚯蚓，延伸于肠系膜的脂肪组织之中。先寻得盲肠，沿肠系膜上溯，剪开肠系膜组织，摘下淋巴结。

   1. 腰部淋巴结

   腰部淋巴结分居于腹主动脉的两侧，附着在其分叉部的上方，两淋巴结皆为卵圆形，左侧腰部淋巴结的位置比较靠近尾端。

   1. 尾部淋巴结

   形状近球形，位居腹主动脉分支处，偏靠右侧，体积比较小，要细心寻找。

   1. 胃部分淋巴结

   其位置可有一些变化，大多数可以在小弯部寻得一个极小的淋巴结，偶或于贲部或食道下端部可得两个淋巴结。

   1. 腋窝部淋巴结

   近球形，位于左右腋窝浅表的皮下脂肪组织中，不难找到。但剖取时不能从局部分开皮肤，否则解剖关系搅乱，不易找到。

   小鼠淋巴结数目和长径

   1. 淋巴结数目

   多数部位只见一个淋巴结，但在颈浅部、胸内部、胃部、胰部以及肠系膜部都可见到 2～3 个淋巴结，也有多至 4 个，其中以胸内淋巴结数目变化的情况较多。不同部位剖得淋巴结的概率是不同的。例如颈深部，尾部或坐骨部的淋巴结难以寻找，要求比较纯熟的解剖技术和细心的操作；而寻找颈浅部、腋窝部或肠系膜部的淋巴结则容易成功。

   1. 淋巴结的长径

   绝大多数淋巴结的长径在 2～3.5 mm，最大者为肠系膜淋巴结，其长径都在 10 mm以上，最小者为颈深部，坐骨部和尾部淋巴结，长径皆等于或小于1 mm。一般正常淋巴结，其长径都不超过 4 mm。