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        核酸的紫外吸收

        互联网

        22146

        嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,使碱基、核苷、核苷酸和核酸在 240~290nm 的紫外波段有一强烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性。 DNA 钠盐的紫外吸收在 260nm 附近有最大吸收值 ,其吸光率( absorbance )以 A260 表示, A260 是核酸的重要性质,在核酸的研究中很有用处。在 230nm 处为吸收低谷, RNA 钠盐的吸收曲线与 DNA 无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。

        实验室中最常用的是定量测定小量的 DNA RNA 。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出 260nm 280nm OD 值,因为蛋白质的最大吸收在 280nm 处,因此从 A260 /A280 的比值即可判断样品的纯度。纯 DNA A260 /A280 应为 1.8 ,纯 RNA 应为 2.0 。样品中如含有杂蛋白及苯酚, A260 /A280 比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。对于纯的核酸溶液,测定 A260 ,即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量,核酸的比吸光系数是指浓度为 1 μ g mL 的核酸水溶液在 260nm 处的吸光率,天然状态的双链 DNA 的比吸光系数为 0.020 ,变性 DNA RNA 的比吸光系数为 0.022 。通常以 1OD 值相当于 50 μ g mL 双螺旋 DNA ,或 40 μ g mL 单螺旋 DNA (或 RNA ),或 20 μ g mL 寡核苷酸计算。这个方法既快速,又相当准确,而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后,经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。

         

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