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        核酸的定量测定:紫外吸收法

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        一、目的:
        学习和掌握应用紫外分光光度法直接测定核酸含量的原理及技术。熟悉紫外分光光度计 的基本原理与使用。
        二、原理:
        DNA和RNA都有吸收紫外光的性质,它们的吸收高峰在260nm波长处。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸 或核酸都有吸收紫外光的特性,核酸和核苷酸的摩尔消光系数(或称吸收系数)用E(P)来表示,E(P)为每升溶液中含有一摩尔原子核酸磷的消光值(即光密度或称光吸收)。RNA的E(P)260 nm(pH7)为7700—7800。RNA的含磷量约为9.5%,因此每毫升溶液含1微克RNA的光密度值相当于0.022—0.024。小牛胸腺DNA钠盐的E(P)260 nm(pH7)为6600,含磷量为9.2%,因此每毫升溶液含1微克DNA钠盐的光密度值为0.020。
        蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低,故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上;DNA的260nm与280nm吸收的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。
        三、器材与试剂:
        1.器材:
        ①容量瓶(50毫升)。
        ②离心管。
        离心机
        ④紫外分光光度计。
        2.试剂:
        ①钼酸铵-过氯酸沉淀剂
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