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        染色体步移(chromosome walking)

        互联网

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        在克隆基因组基因时,已知该基因在染色体上的位置但没有该基因的序列信息,无法制备相应的探针,因此无法直接筛查文库去克隆基因。此时,如果知道离开该基因一定距离上的 DNA 序列,则可用这个 DNA 序列作探针,通过染色体步移来逐步接近并最后达到待克隆的基因。其基本原理是用探针筛查文库,得到阳性克隆后,将这个重组载体中的插入片段分离出来,然后用这个片段的末端部分 ( 注意不能包含重复序列 ) 作为新一轮筛查文库的探针;得到新的重组载体中的插入片段,同上一个插入片段的末端部分 ( 即探针序列 ) 是重叠的,共有的。也就是这两个片段是在同一条染色体上相互邻接的。’于是,再用新得的插入片段的末端部分作为探针,再去筛查文库。通过一系列的操作,得到的插入片段逐渐连接延伸,最后可以步移到待克隆的基因。当然,在具体操作过程中还必须设计具体的方法,如同时构建跳步文库 (jumping library) 和连接文库 (1inking library) 等,使插入片段朝着一个方向步移。

         

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