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        生长谱法

        最新修订时间:

        原理

        微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境,碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等都是微生物生长所必需,缺少其中一种,微生物便不能正常生长、繁殖。在实验室条件下,人们常用人工配制的培养基来培养微生物,这些培养基中含有微生物生长所需的各神营养成分。如果人工配制一种缺乏某种营养物质(例如碳源)的琼脂培养基,接人菌种混合均匀后倒平板,再将所缺乏的营养物质(各种碳源)点植于平板上,在适宜的条件下培养后,如果接种的这种微生物能够利用某种碳源,就会在点植的该种碳源物质周围生长繁殖,呈现出由许多小菌落组成圆形区域(菌落圈),而该微生物不能利用的碳源周围就不会有微生物的生长,最终在平板上呈现一定的生长图形。由于不同类型微生物利用不同营养物质的能力不同,它们在点植有不同营养物质的平板上的生长图形就会有差别,具有不同的生长谱,故称此法为生长谱法。该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的需求,在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品质量检测等诸多方面具有重要用途。

        材料与仪器

        步骤

        1. 将培养 24 h 的大肠杆菌斜面用无菌生理盐水洗下,制成菌悬液。


        2. 将合成培养基溶化并冷却至 50℃ 左右,加入上述菌悬液并混匀,倒平板,


        3. 在两个已凝固的平板皿底用记号笔分别划分成三个区域,并标明要点植的各种糖,如图所示。

        生长谱法
        生长谱法测定大肠杆菌碳源要求示意图


        4. 用 6 根无菌牙签分别挑取 6 种糖对号点植。


        5. 待糖粒溶化后再将平板倒置于 37℃ 温室保温18~24 h ,观察各种糖周围有无菌落圈。

        注意事项

        1. 点植时糖要集中,取糖量为小米粒大小即可,糖过多时,溶化后糖溶液扩散区域过大会导致不网的糖相互混合。


        2. 点植糖后不要匆忙将平板倒置,否则尚未溶化的糖粒会掉到皿盖上。

        来源:丁香实验

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