罗特分析 Rot analysis
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系从 RNA与 DNA(单链)间的杂种双链分子的形成速度,来分析某一细胞或组织中的 RNA,是由基因组 DNA哪一部分转录来的一种方法。与分析单链 DNA间形成双链分子的速度的 COt分析相对应,而将这个 RNA- DNA间的分析称为 ROt分析( RNA- COt之意)。一般使用放射性同位素标记的 DNA在 RNA过剩的条件下进行结合反应( RNA drivenhybridization)。因 RNA过剩而 DNA浓度( D)非常低,所以 DNA- DNA的结合可以忽略, RNA的开始浓度( R0 )在反应进行时几乎无变化,所以单链 DNA的变化速度可用 dD/ dt=— kROD来
级反应。以 D/ D0 为纵轴, Rot( = R0 t1 罗特)为横轴而绘成的曲线称为罗特曲线。一般在 DNA双链中可转录为 RNA的只是单链。所以 D0 中只有一半与 RN- A结合。将 D0 之半值再缩至 1/ 2时 R0 t值的定义为 R0 t1/ 2,而 R0 t1 / 2= 1n2 / k。将 DNA浓度中会合的比例加以修正,则 R0 t1/ 2= 0. 51n2 / k。因在同样条件下 DNA- DNA和 DNA- RNA的结合速度常数大致相等,所以应用 DNA的碱基排列的复杂度( G)与 Cotl/ 2的关系 G=kCotl/ 2,可求出 RNA分子群的碱基排列的复杂度( sequence complexity)。另外,从 RNA- DNA结合反应达到饱和水平时,形成杂种分子的 DNA比例,可求出基因组有多大部分被转录。为了求出 RNA从 DNA的哪一排列级为转录来的,应用在 DNA过剩条件下的杂种分子形成( DNA driven hybridization)速度分析法。
