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    电泳和Western转印的常见问题

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    表1 Common problems for electrophoresis and western bloting
    问 题 可能原因 建议解决方法
    推荐电压条件下电泳时间过长。 电泳缓冲液过稀。 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。
    推荐电压条件下电流过高，热量过大。 电泳缓冲液过稀。 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。
    推荐电压条件下电流过低或无电流。 接触不良。 在电泳前移除胶盒底部的封条；确认缓冲液没过加样孔；检查buffer core上导线连接。
    蛋白带型条状（streak） 上样过量。
    样品中盐浓度过高。    		 降低蛋白上样量。通过透析或凝胶过滤降低样品中的盐浓度。
    样品沉淀。 加大样品中SDS的浓度。
    样品中的污染，如脂类或DNA 复合物。 离心或过滤样品以除去特定污染。
    制胶不佳。 确保灌胶均匀，一次完成。
    条带模糊。 蛋白样品部分变性。 完全变性蛋白。
    蛋白样品部分还原。 确保加入足够量的DTT或β巯基乙醇。
    电泳时间过长。 观察前面的指示剂染料，掌握恰当的电泳时间。
    哑铃形条带或"微笑"条带。 上样体积过大导致不完全堆积。 使用恰当的上样体积。如果样品过稀，使用超滤浓缩。
    电泳过程中电场不均匀。 如果蛋白浓度已知，上样时确保对称。
    分离胶表面不平。 在制胶时使分离胶表面水平。
    凝胶过期。 在指定的失效期前使用凝胶。
     

     

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