RT-PCR引物的选择

 

随机引物              适用于长的或具有发卡结构的 RNA 。适用于 rRNA 、 mRNA 、 tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。                                                    Oligo dT               适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA 。（原核生物的 RNA 、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具有 PolyA 尾巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。                                                    基因特异性引物    与模板序列互补的引物，适用于目的序列已知的情况。天为时 性引物 代公司的 SuperScript One-Step System 特别适合于与基因特异性 引物连用。

 

PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异

 

性扩增带与非特异性扩增带。

 

 

 

 

 

 

4. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将 dNTP 、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；
5. 最后加入 反应模板 ，加入后盖紧反应管