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        人Endorphin-b定量EIA试剂盒使用说明

        互联网

        884

         

        上海西唐生物科技有限公司   021-55229872,  65333639   www.westang.com

        Endorphin- b 定量 EIA 试剂盒使用说明

         

        原理

        本实验采用双抗体夹心  ELISA 法。用抗人 Endorphin- b 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的  Endorphin- b 与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB ,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在 4 50 nm 处测 OD 值,Endorphin- b 浓度与 OD 值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Endorphin- b 浓度。

        试剂盒组成 2-8 ℃保存)

        酶标 Coated Wells

        96

        酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate

        6ml

        10 ×标本稀释液(Sample Buffer

        12ml

        20×浓缩洗涤液( Wash Buffer

        50ml

        标准品 Standards 6

        一套

        底物工作液(TMB Solution

        12ml

        封板纸

        一张

        终止液 Stop Solution

        12ml

        准备试剂与收集血样

        1.  收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20   -70   )保存,避免反复冻融。

        2.  标准品第一次使用时用0.5ml 的蒸馏水溶解,放置半小时混匀后使用,用后放在 -20 o C 保存。溶解后浓度分别为 35 20 8 4 2 0 ng /ml

        3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。

        4.  洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)

        检测程序

        1.  建立标准曲线:设标准孔 6 孔,每孔各加入标准品50ul

        2.  加样:待测品孔每孔各加入待测样品 50ul

        3.  每孔加酶标抗体工作液50ul 。将反应板置 37 ℃反应 12 0 分钟。

        4.  洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。

        5.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   暗处反应15 分钟。

        6.  每孔加入100ul 终止液混匀。

        7.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

        结果计算与判断

        1.  所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

        2.  以标准品35 20 8 4 2 0 ng /ml 为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。

        3.  根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 Endorphin- b 含量。

        试剂盒性能

           1.    灵敏度 最小的Endorphin- b  检测浓度小于 1ng /ml

        2.  特异性: 可同时检测重组或天然的人 Endorphin- b 不与 人其它细胞因子有交叉反应。

        3.  重复性:板内、板见变异系数均小于10%。

        注意事项

           1.    以上标准孔及待 样品均建议做复孔,每次测定应同时 标准曲线。

         2.   洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

           3.    板条开封后剩余板条要再封好,保持 板条干燥

           4.   本试剂盒宜置 4 o C冰箱保存。

         5.    本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

         

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