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        B 细胞活化

        相关实验:B 细胞的活化

        最新修订时间:

        简介

        B 细胞在特异性抗原、抗 Ig 抗体和(或)促有丝分裂原等的激活后,可发生活化、增殖。

        材料与仪器

        试剂:

        (1)纯化的 B 细胞。

        (2)抗 IgM 抗体、细菌 LPS(E.coli;Difco#011B4)。

        (3)可溶性 CD40L、抗鼠或人 CD40 抗体。

        (4)含 10% FCS 的 RPMI 1640 培养液。

        仪器:

        (1)48 孔平地培养板,

        (2)流式细胞仪


        步骤

        B 细胞活化的基本过程可分为以下几步:


        (1)纯化的 B 细胞,用含 10% FCS 的 RPMI 1640培养液调整 B 细胞浓度为 10/ml。


        (2)向 48 孔平底培养板中加入1ml B 细胞悬液,即 1x10/孔。


        (3)向 B 细胞悬液中加入下列刺激物之一,每个条件设 3 个复孔:


        1)抗 IgM 抗体,2~200μg/ml;


        2)LPS, 1~100μg/ml;


        3)sCD40L, 0.03~0.1μg/ml;


        4)抗 CD40 抗体,0.2~0.5μg/ml;


        5)不加任何刺激剂,阴性对照。


        (4)将培养板置于 37℃、5% CO2 细胞培养箱中培养 24~72 小时,即可得到活化的 B 细胞。


        (5)收集 B 细胞,用 FACS 法表面标记活化 B 细胞的表面分子,如 MHC II 类分子、CD80 和 CD86 等的表达。


        来源:丁香实验

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