细胞生物基本方法：微生物污染的排除

微生物污染的排除

 

细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难排除或杀灭，其中以支原体更难排除，因此从预防着眼为上。

 

 

1）  抗生素除菌法：用 BM － 1 （截耳素衍生物）和 BM － 2 （四环素衍生物）抑制支原体

1． 抗生素制备：均可用 PBS 配成 250 ×浓缩液－ 20 ℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》 117 页表 6 － 2 。

2． 处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含 BM-1 的 1640 培养液培养 3 天后，吸除培养液，再加入含 BM-2 的 1640 培养液培养 4 天，如此连续三个轮回。

3． 检测：用 33258 荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）。

4． 培养：清除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培养液中，再传代培养 3 ～ 4 次。

5． 镜检：如清除不彻底可再进行处理至纯净为止（一般 3 个轮回即能被完全消除）。 BM-1 和 BM-2 与 CIP （ 4- 氟， 2- 羟基喹啉）联合应用亦可，即先用含 BIP 培养液培养 12 天后，再按上述方法处理。

 

 

2）  加温除菌法

把受污染的细胞置 41 ℃中作用 5 ～ 10 小时。

 

 

3）  动物体内接种除菌法

把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖。

 

 

4）  巨噬细胞吞噬法

从动物腹腔采取巨噬细胞，为排除其它细胞成分，可先进行纯化，然后再加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中，为检查支原体是否已被消除干净，可利用支持物培养法验证，取出支持物逐日染色、镜检观察，至支原体已被消除干净为止。