方案19.4 消除微生物污染

通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞，以高浓度抗生素清洗培养物数次，然后将培养物传代，用加抗生素的培养基传三次，再用不加抗生素的培养基传三次，每次传代后都要检测是否污染。

1. 仔细收集污染培养液，如有可能，应测试该有机体对一系列抗生素的敏感性，如果做不到，则应对培养液进行高压灭菌或加入次氯酸盐。

2. 用 DBSS 冲洗细胞（每一次冲洗可使污染物浓度减少两个对数级，除非污染物黏贴在细胞上）。

(a)对于单层培养物，用 DBSS 冲洗培养物三次，然后用胰蛋白酶处理，再用 DBSS 通过离心与再悬浮清洗细胞两次以上。

(b)对于悬浮培养物，通过离心和重悬，用 DBSS 冲洗培养物 5 次。

3. 将细胞以尽可能低而又合适的细胞浓度接种于新的培养瓶内。

4. 加入含高浓度抗生素的培养基，每两天换一次。

5. 用高浓度抗生素培养基进行传代培养。

6. 重复进行 1~4 的步骤，传代培养三次。

7. 移去抗生素，在无抗生素情况下，将这些细胞再进行三次传代培养。

8. 用相差显微镜及 Hoechst 染色检査培养物。

9. 对这些细胞再进行两个月的培养，不加抗生素，检査以确定所有污染已被消除。

一般的原则是应将污染的培养物丢弃，而不要试图去除污染，除非是至关重要必须保留的细胞系才考虑去除污染。在任何情况下，很难做到完全消除污染。特别是在酵母污染时，如果试图去除污染，可能导致产生更顽固的对抗抗生素的细胞。