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        细胞株的培养、冻存和复苏

        互联网

        1390

         

        细胞株的培养、冻存和复苏

         

        1 )细胞株的培养和传代

         

        培养:

        用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含 10 %小牛血清和抗生素的培养液中,培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。在 37 5 CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养, 3 4 天传代一次。

         

         

        悬浮生长细胞的传代:

        直接直接吸去或离心后吸去培养上清液,用新鲜培养液悬浮细胞, 1 3 1 5 稀释细胞后,分瓶继续培养。

         

         

        帖壁生长细胞的传代:

        吸去培养液,用 PBS 洗涤细胞一次,加入消化液,在 37 ℃中消化约 3 10 分钟,待细胞开始脱落时,倒去消化液,加入新鲜培养液,悬浮和吹打分散细胞。也可以待细胞完全消化脱落, 500 × g 离心 5 分钟,去除消化液,用新鲜培养液悬浮细胞。 1 3 1 5 稀释细胞后,分瓶继续培养。

         

         

        2 )细胞株的冻存:

         

        1. 取培养 2 3 天生长旺盛的细胞,用细胞培养液将细胞配成 2 × 106 2 × 107 /ml

        2. 1ml 细胞冻存管中加入 0.5ml 细胞悬液, 0.4ml 小牛血清和 0.1ml 二甲基亚砜(或甘油),混匀后密封。置 4 1 小时,- 20 2 小时,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。

         

         

        3 )细胞株的复苏:

         

        复苏时,从液氮中取出冻存管,立即置 37 ℃水浴中融化细胞。将细胞直接加入 10ml 15 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液中,置 37 5 CO2 饱和水汽二氧化碳培养箱中培养。悬浮细胞待细胞全部沉降后小心吸去上清液,更换新鲜的上述培养液,继续培养;帖壁细胞则培养 2 3 小时,待细胞帖壁后,倒去培养液,更换新鲜的上述培养液,继续培养。也可以在加入新鲜培养液以后, 500 × g 离心 5 分钟,去上清液,加入新鲜培养液,继续培养。

         

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