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        免疫酶组化法(猪瘟组化法)

        互联网

        1993
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        材料与试剂
        1.α-萘酚液
        α一苯酚 1.00g
        40%乙醇 100.00ml
        3%H2O2 0.20ml
        混合即可,现用现配。
        2.派洛宁液
        派洛宁(Pyroming) 0.10g
        苯胺(Aniline) 4.00g
        40%乙醇 96.00ml
        3.内源性酶抑制剂:0.01%H2O2 的0.01%的叠氮钠溶液。
        1%H2O2 1.00ml
        1%Na N3 1.00ml
        0.015mol/L pH 7.4 PBS 液 100.00ml
        4.0.05Mol/L pH 7.6 Tris-HCl缓冲液
        A液:0.2mol/L Tris液
        三羟甲基氨基甲烷 2.43g
        H2 O 100.00ml
        B液:0.1mol/L HCl
        取A液25ml,B液38.9ml,混合,加蒸馏水至100ml即可。
        5.DAB液(Karnovsky液)
        0.05Mol/L pH 7.6 Tris-HCl缓冲液 100.00ml
        3,3-二胺基联苯胺盐酸盐 76mg
        1% H2O2 0.5ml
        配后立即使用。
        6.0.10Mol/L pH7.4 PBS液。

        操作方法
        1.猪瘟酶标抗体工作滴度的确定 对组化法来说,最简单的确定工作滴度的方法是将酶标抗体进行一系列的倍比稀释,然后对已知阳性标本片进行染色,以最为清晰的阳性结果的最大稀释倍数或稍提高1~2滴度作为工作滴度。
        购买商品猪瘟酶标抗体,则按其说明的工作浓度稀释即可。
        2.待检标本片的制作 取可疑猪瘟病猪尸体或急宰病猪立即剖检,采取肾脏、脾脏、淋巴结等脏器进行触片(或涂片)或冷冻切片(4µm厚度)。余下组织低温冰箱 保存或放于盛有50%甘油盐水中于普通冰箱保存,以备复检或比较用。也可采病猪之血作血球粥片。标本片干后,立即以4℃的丙酮液固定15min。固定后的标本片可贮藏于4℃冰箱中备用。

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