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        🔥 免疫组化实验全流程

        相关实验:免疫组化

        最新修订时间:

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        合作专家 | 雷庆强硕士

        免疫学 四川大学

        简介

        免疫组化(Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC)是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理。

        通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(Immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(Immunocytochemistry)。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。

        材料与仪器

        仪器设备

        (1)18 cm 不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;

        (2)水浴锅。


        试剂

        (1)PBS 缓冲液(pH 7.2~7.4):NaCl 137 mmol/L, KCl 2.7 mmol/L, Na2HPO4 4.3 mmol/L, KH2PO4 1.4 mmol/L。

        (2)0.01 mol/L 柠檬酸盐缓冲液(CB, pH 6.0, 1000 ml):柠檬酸三钠 3 g, 柠檬酸 0.4 g。

        步骤

        (1)0.5 mol/L EDTA 缓冲液(pH 8.0):700 ml 水中溶解 186.1 g EDTA·2H2O,用 10 mmol/L NaOH 调至 pH 8.0,加水至 1000 ml。

        (2)1 mol/L 的 TBS 缓冲液(pH 8.0):在 800 ml 水中溶解 121 g Tris 碱,用 1 N 的 HCl 调至 pH 8.0,加水至 1000 ml。

        (3)酶消化液:

        a、0.1% 胰蛋白酶液:用 0.1% CaCl2(pH 7.8)配制。

        b、0.4% 胃蛋白酶液:用 0.1 N 的 HCl 配制。

        (4)3% 甲醇-H2O2 溶液:用 30% H2O2 和 80% 甲醇溶液配制。

        (5)封裱剂:

        a、甘油和 0.5 mmol/L 碳酸盐缓冲液(pH 9.0~9.5)等量混合;

        b、油和 TBS(或 PBS)配制。

        (6)TBS/PBS pH 9.0~9.5, 适用于荧光显微镜标本;pH 7.0~7.4 适合于光学显微镜标本。

        来源:丁香实验

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