蛋白A—胶体金(PAg)复合物的制备方法

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蛋白A—金(PAg)复合物的制备(Slot 和Geuze,1981)，主要包含以下四个步骤胶体金液的制备、待标记蛋白质和金溶液的准备、确定胶体金与蛋白A的结合用量比例、胶体金与蛋白A的结合和纯化。

(1)胶体金液的制备，应用枸椽酸三钠还原法(见还原法制备胶体金的五种方法 )。

(2)待标记蛋白质和金溶液的准备，同前。注意点是用0.2mol/l K2CO3将金溶液pH调至5.9～6.2之间。

(3)确定胶体金与蛋白A的结合用量比例。取一系列盛有0.1ml胶体金液的小玻璃管，分别加入不同量的蛋白A，5min后，再各加0.25ml 10%的NaCl。如加入的蛋白A浓度不够，不能稳住金粒，在电解质NaCl的影响下，金粒聚合沉淀，溶液由红变蓝。选择能防止溶液由红变蓝的最低浓度的蛋白A的量作为两者的结合比例。以枸椽酸钠法制成的胶体金每毫升约需要5μg蛋白A来结合，方能保证其稳定性。

(4)胶体金与蛋白A的结合和纯化，依上法测得所需的比例超过10%，即每30ml胶体中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作为稳定剂，然后以15000r/min离心45min(不同方法制备的金离心速度不同)，略带红色的松散的复合物沉淀即为PAg复合物。小心弃去上清液，加入PBS 冲洗，如上，松散的PAg复合物置于PBS溶液中，按0.2mg/ml的比例加入聚乙二醇作为稳定剂，保存于硅化的玻璃器皿中备用，也有主张将上述PAg复合物放入3～6ml 5%甘油—0.05%聚乙二醇—0.02%叠氮钠混合液中，再离心，弃去无色上清液后，收取管底部浓缩纯化的PAg复合物置4℃保存。

据文献报告，此PAg复合物的原液在4℃可保存达一年之久。