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        细胞的分裂指数测定

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        一、原理
        体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。
        分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比,它是测定细胞周期 的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
        二、仪器、用品与试剂
        1、仪器与用品:CO2培养箱、普通显微镜、细胞培养 血、盖玻片、吸管
        2、试剂:培养液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
        三、操作步骤
        1、消化细胞,将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。
        2、CO2培养箱中培养48小时,使细胞长在盖片上。
        3、取出盖片,按下列顺序操作:
        PBS 漂洗3分钟→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。
        4、盖片晾干后反扣在载玻片上,镜检。
        5、计算:

        分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%
        四、注意事项
        操作时动作要轻,以免使盖片上的细胞脱落。
        附:Giemsa染液配制:
        称Giemsa粉末0.5克,加几滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油总量为33ml)。56℃中保温90—120分钟。加入33ml甲醇,置棕色瓶中保存,此为Giemsa原液。
        使用时按要求用PBS稀释。一般稀释10倍。
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