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        免疫荧光样品制备与观察

        互联网

        2018
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        一、原理
        (一)什么是荧光,简单地讲,当用一定波长的光(如紫外光)照射某种物质时,经过照射的物质在极短时间内即可发射出一种可见的光,这种光即为荧光。
        在生物中,由于产生荧光的方式不同,可以概括地归纳为以下几种:
        1.自发荧光:在生物的某些组织中,经紫外线照射后能直接发射出荧光的称为自发荧光(或直接荧光)。如植物 组织中的叶绿素,经紫外线照射后,即可发出红色荧光。
        2.次生荧光:有些生物组织经紫外线照射后,并不能发出荧光,但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光,这种称为次生荧光(或间接荧光)。如吖啶橙,DAPI均可检测细胞内的核酸。
        3.免疫荧光:这种染色法是利用抗原 与抗体反应的原理,将荧光染料与抗体结合,然后,将这种标记荧光染料的抗体再与相应抗原结合,即形成抗原、抗体复合物。经一定波长的光激发后,即可发射出荧光,以此辨认抗原在组织细胞内的分布状况。这种方法被称为免疫荧光(或荧光抗体法)。
        组织和细胞中所产生的荧光,须借助荧光显微镜 方可进行观察,本实验是用普通显微镜配以一种轻便的荧光光源观察荧光现象。

        (二)轻便落射光装置
        落射光装置的组成:此装置是为普通显微镜配套设计的。它是由两部分组成,一为光源;另一为落射光系统,如图,落射光系统由激发滤片组成。当光线通过激发滤片到达二向分光镜时,使激发光反射,经物镜后,激发标本,标本辐射荧光,又通过物镜,分光镜而到达目镜,以供观察者观察及记录。
        二、目的与要求
        初步了解生物荧光及荧光染色法,学习几种生物荧光标本的制作与观察。

        三、实验内容
        (一)生物自发荧光的观察
        (二)生物的荧光染色法
        (三)荧光抗体法

        四、实验步骤
        (一)生物自发荧光的观察
        1. 制片
        (1)取一干净载玻片
        (2)用吸管吸取眼虫培养物,滴于载玻片的中央位置。
        (3)用镊子取一张盖玻片,沿液体的边缘轻轻的盖上盖玻片。

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