• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        啤酒酵母菌营养缺陷型菌株的筛选

        互联网

        1886
        相关专题
         

        一、实验原理

        利用化学诱变剂诱发突变 是遗传学研究和育种工作的常用手段。

        化学诱变剂按其诱变机理一般可分为三类:(1)通过掺入DNA分子引起突变,(2)通过和DNA直接起化学反应后引起突变,(3)通过一对核苷酸的插入或缺失引起突变。本实验以烷化剂亚硝基胍(nitrosoguanidine,NTG)为诱变源,它的诱变机理属于第二类。现在一般认为烷化剂的诱变机理主要是由于对鸟嘌呤N-7位置上的烷化作用(鸟嘌呤其它位置以及其它碱基的许多位置也可能被烷化),然后被烷化的碱基同碱基结构类似物作用机制一样,通过DNA复制 ,引起碱基错误配对导致碱基转换或颠换造成基因突变。通常烷化后的碱基(G)偶然与胸腺嘧啶(T)错误配对代替胞嘧啶(C)。

        NTG主要诱发GC—AT的转换。它除有较强的诱变作用外,还能诱发邻近位置基因的并发突变,而且特别容易诱发DNA复制叉附近的基因突变 ,随着复制叉的移动,它的作用位置也随着移动。

        NTG是一种超诱变剂,它的诱发效率可使百分之几十的细菌发生营养缺陷型突变,因此经NTG处理的细菌不必经过青霉素浓缩处理,而只要通过适当的筛选方法就能检出营养缺陷型。一般讲,一种高效率的诱变剂,只要有一种有效的筛选方法是可以获得任何突变型的。

        诱变处理所用的细胞一般为对数期细胞。化学诱变剂的剂量一般以药物浓度表示。一定的剂量有一定的杀菌率和诱变率,通过杀菌率和诱变率可帮助我们了解一定剂量的诱变作用。诱变作用往往与药物处理时间和温度有关。具有较强诱变作用,较弱杀菌作用的诱变剂(如烷化剂)可采用较低剂量(约50%的杀菌率),反之,紫外线一般采用较高杀菌作用的剂量(如90%—99.9%杀菌率)。

        二、实验材料

        1.啤酒酵母菌单倍体26-4(来自上海酵母厂)。

        2.啤酒酵母菌单倍体143—2(来自上海酵母厂)。

        三、实验器具和药品

        1.用具:培养皿(9厘米),三角瓶(150毫升),试管,离心管,吸管(1毫升、5毫升),玻璃涂棒,玻璃珠,丝绒布,圆木柱。

        2.培养基

        (1)基本培养基:葡萄糖10克,CaCl2·2H2O0.1克,KH2PO40.876克,(NH4)2SO41克,K2HPO40.125克,MgSO4·7H2O0.5克,NaClO.1克,KI母液1毫升,微量元素母液1毫升,维生素母液1毫升,蒸馏水加到1000毫升。高压灭菌8磅25分钟。

        注:①碘化钾母液:1克/毫升。

        ②微量元素母液:H3BO3(硼酸)1毫克/100毫升、ZnSO4·7H2O(硫酸锌)7毫克/100毫升、CuSO4·5H2O(疏酸铜)1毫克/100毫升、CoCl2·6H2O(氯化钴)5毫克/100毫升。

        ③维生素母液:维生素B140毫克/100毫升、烟碱酸40毫克/100毫升、肌醇200毫克/100毫升、核黄素20毫克/100毫升、对-氨基甲酸20毫克/100毫升、吡哆醇40毫克/100毫升、泛酸20毫克/100毫升、生物素3毫克/100毫升。以上三种母液都需高压灭菌15磅15分钟。

        (2)基本固体培养基:在上述培养基加2%琼脂即可。

        (3)完全液体培养基:蛋白胨20克、酵母浸出汁10克、葡萄糖20克、蒸馏水1000毫升,pH6.0,高压灭菌8磅25分钟。

        (4)完全固体培养基:在上述培养基加2%琼脂即可。

        (5)无菌水

        (6)生理盐水(0.85%)

        (7)0.2mol/L磷酸缓冲液(pH6.0):0.2mol/LNa2HPO412.3毫升、0.2mol/LNaH2PO487.7毫升。

        3.诱变剂:亚硝基胍(NTG)。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序