细胞表面抗原染色的组织样本制备方法

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该方法适用于新鲜和冷冻标本

1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片，用缓冲液或培养液浸湿。

2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon 二遍。

3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中，盖上盖子，将Medicon 插入到Medimachine中。

4.降解组织。降解组织的时间长短依赖于组织类型。(参见降解时间表)。

5.用注射器通过 Medicon上的注射器接口将上清吸去。

6.用1ml缓冲液或培养液冲洗Medicon三遍。

7.选择适当大小孔径的Filcon 滤器 过滤细胞悬液。(50-mmFilcon 适用 于大 多数组织，如：淋巴结、肿瘤组织、皮肤组织)

8.用1ml缓冲液或培养液冲洗Filcon三遍。

9.250g离心细胞悬液5分钟。

10.用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。

11.若需要，重复3-10步骤。

12.调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。

13.用适当浓度的抗体在2-80C与100ml细胞悬液孵育15-30分钟。

14.加2ml 冷的缓冲液或培养液(2-80C), 250g离心5分钟。

15.用缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。

16.分析样本。

注意：

1.在处理和接触有感染危险性生物样本时，应根据相关法规处理 废液。避免皮肤或粘膜接触样本。勿用嘴移液。

2.该方法虽经验证，但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织 类型进行适当调整。

降解时间表：

组织

数量(3-6mm3小块)

脉冲

时间

条件

乳腺组织

3-6

2次

30秒

新鲜或冷冻

膀胱

4-5

2次

20秒

新鲜或冷冻

结肠

3-6

2次

20秒

新鲜或冷冻

胃

4-6

2次

20秒

新鲜或冷冻

胃肿瘤边缘组织

3-6

2次

20秒

新鲜或冷冻

健康组织、胃肿瘤

3-4

2次

20秒

新鲜或冷冻

淋巴结

3-6

2次

15秒

新鲜或冷冻

脾脏

3-6

2次

15秒

新鲜或冷冻

肝脏

3-6

2次

15秒

新鲜或冷冻

卵巢

3-6

2次

30秒

新鲜或冷冻

前列腺

2-3

2次

35秒

新鲜或冷冻

脑组织

3-6

1次

10秒

新鲜或冷冻

肺组织

2-3

2次

30秒

新鲜或冷冻

子宫

3-6

1次

60秒

新鲜或冷冻

皮肤

3-4

1次

45秒

新鲜或冷冻

注意：

该方法虽经验证，但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织 类型进行适当调整。