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        活细胞表面抗原的荧光染色(直接免疫荧光)

        相关实验:流式细胞计量术(基于荧光的蛋白质分析)实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液,轻摇,收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。

        2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。

        3. 计数细胞,每个样品的最小浓度为 1X106/ml。

        4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清或 1% 的 PBS 溶液。

        5. 加合适滴度的初始抗体,用系列稀释确定合适滴度范围。

        6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

        7. 在含叠氮化物和 BSA 或热的灭活血清的 4 ml PBS 中洗细胞。

        8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

        9. 在相近体积的含 0.1% 叠氮化物和 1% BSA 中重悬细胞,终浓度为 1X106~5X106 /ml。

        来源:丁香实验

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