检测幽门螺杆菌感染几种方法的比较

 

检测幽门螺杆菌感染几种方法的比较

自1983年Warrn和Marshall从胃粘膜成功分离出幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori，Hp）后，与胃炎及溃疡病的关系引人关注，并指出Hp可能是其病因之一。检测Hp感染方法较多。本文对95例胃粘膜组织行细菌培养、尿素酶试验、直接涂片、HE染色、Giemsa染色、改良Warthin－Starry银染检测Hp的方法比较。力求寻找出简便、经济、敏感性、特异性高的方法，实用于临床诊断Hp感染。

1　对象和方法

1.1　对象

　　连续收集1990―03～1990―06因上消化道症状行内镜检查（Olympus GIF XQ ₁₀ ）。胃镜诊断 慢性胃炎 及消化溃疡患者95例。取距幽门5cm内的胃窦粘膜5块，分别供以上各种检测用。男74例，女21例；17岁～62岁，平均年龄42.8岁；其中 慢性胃炎 30例、 胃溃疡 8例，球部溃疡37例，复合溃疡20例。

1.2　方法

　　①细菌培养：将活检标本接种于肉浸液加8％～10％羊血及抗菌混合液的琼脂平板中，于防良厌氧缺罐（5％O ₂ ，7％CO ₂ 、80％N2、8％H ₂ 、湿度98％）内，37℃、培养3d～7d，见1mm～2mm大小的露滴样、光滑、灰白色菌落，菌落涂片镜检生化鉴定（尿素酶、氧化酶、触酶等）。7d不见菌落为阴性。②尿素酶试验：采用改良Christensen细菌尿素酶鉴定 试剂 。取0.1ml试剂于平皿圆孔中，将胃粘膜置于此孔中，试剂由淡黄变淡红色为阳性，不变色为阴性，其中1h内变色为阳性，2h～5h变色为延迟性。③直接涂片：粘膜涂于洁净玻片上，范围为1.5cm×2.5cm大小，酒精灯固定，革兰染色，10×100倍油镜观察。Hp为革兰阴性呈∽、C弯曲状或螺旋状，形态典型。④HE染色：常规HE染色，镜检。40×10倍光镜下生病理诊断，100×10锐油镜下观察Hp。Hp位于胃粘膜上皮表面，胃小凹及胃腺腔中，呈淡红变弯曲状物，较难分辨。⑤改良W－S银染：将脱蜡切片于43℃的1％AgNO ₃ 液中浸润15min，准备显色剂。将浸染的切片于盛有显色剂立式染缸中加盖、加热维持恒温70℃约8min～10min，切片呈浅棕色。取出切片，热水彻底冲洗，脱水，透明，中性树脂封片。100×10倍镜下观察Hp，其在淡黄色背景上呈棕色或褐色弯曲状物，易辨认。⑥Giemsa染色：将脱蜡切片于Giemsa稀释液中浸染20min，待组织呈蓝色，蒸馏水漂洗，PBS液分色约3min～5min，透明，中性脂封片。100×10倍镜下观察。Hp呈深蓝色弯曲状物，较易分辨。⑦菌量分级：菌Marshall分级法0级；无菌；Ⅰ级：认真寻找可见；Ⅱ级：多数高倍视野可见；Ⅲ级：高倍视野很多或成堆成串。

　　所有资料按四格表行X ² 检验，若例数小于40或理论值小于1，则采用确切概率法计算。

2　结果

表1　检测Hp各种方法的检出率

检测方法

n

阳性

阴性

假阳性

假阴性

敏感性(％)

特异性(％)

检出率(％)

细菌培养

95

60

35

0

8

88.2

100.0

63.2

尿素酶试验

95

66

29

1

3

95.6

96.4

69.5

直接涂片

95

58

37

1

10

85.0

96.4

61.1 ^a

HE染色

95

56

39

0

12

69.0

100.0

58.9 ^a

Giemsa染色

95

68

27

2

2

97.1

92.5

71.5

改良W－S

95

71

24

4

1

98.5

86.7

74.7

　　 ^a P＜0.05

表2　胃粘膜组织切片三种染色菌量分级

染色方法

n

＋

++

+++

－

阳性率(％)

HE

95

27

22

7 ^b

39

58.9

Giemsa

95

16

24

28

27

71.6

改良W－S

95

14

30

27

24

74.7

　　 ^b P＜0.01

在各种方法中，改