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        体外分化-拟胚体方法检测ES多能性方法

        相关实验:小鼠胚胎干细胞分化潜能检测

        最新修订时间:

        简介

        体外分化的方法多种多样,但是针对 ES 多能性鉴定,一般采用拟胚体(embryoid body,EB)的方法对其三胚层分化能力进行评价。

        材料与仪器

        器材:

        ① 显微镜
        ② 培养箱
        ③ 培养板

        试剂:

        ① 杜氏磷酸缓冲液(PBS)
        ② ES 细胞
        ③ retinoic acid(RA)

        步骤

        体外分化-拟胚体方法检测 ES 多能性方法的基本过程为:

        1. 将 ES 细胞消化离散成约 10/ml 悬液,接种于无滋养层,无 LIF 生长因子的培养板上,用成纤维培养基培养;为加速分化过程,培养基中可适量添加 retinoic acid(RA)等分化诱导物质,或悬滴培养使细胞黏附成团。

        2. 培养 3~4 天后形成 EB,最外层分化成较大细胞组成的内胚层样结构,中间为未分化的干细胞。

        3. 培养 8~10 天后,EB 增大,内部出现囊腔,形成囊状胚体。

        4. 在囊腔和早期分化出的内胚层之间的细胞发育成类外胚层,为上皮样细胞,该结构可持续存在 3 周左右。

        5. 得到的拟胚体进一步切片,染色确定其内三胚层细胞的分布。

        来源:丁香实验

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