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        植物愈伤组织的培养

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        愈伤组织是指切取植物体的一部分,置于含有生长素和细胞分裂素的培养液中培养,诱导产生的无定形的组织团块。愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段,同时也是植物改良,种质保存和有用化合物生产的理想途径。


        愈伤组织
         

        一、无菌播种

        (一)实践目的

        学习利用植物种子的胚轴进行愈伤组织培养的方法,主要是种子的无菌接种技术。

        (二)实践地点和时间

        植物组培室

        (三)实践用具与材料

        超净工作台、手术剪、枪状镊、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、植物种子、70%酒精、0.1%升汞、ZT、2,4—D、大量元素、微量元素、琼脂、蔗糖

        (四)实践内容

        1、培养基制备

        配制MS培养基:用大量元素、微量元素、维生素、铁盐配制,不加植物生长物质。

        每升培养基加入30/L蔗糖、8g琼脂,将pH值调节到5.8。

        2、高压灭菌

        培养基入高压锅1.11-1.12Pa下稳压灭菌23分钟,制备无菌水,同样高压灭菌30分钟,灭菌时将接种器械和纱布等放入高压锅一同灭菌。

        3、无菌苗的制备

        选择健康饱满的种子,流水下清洗干净,置超净工作台上。无菌水冲洗2-3 次后,视材料情况,(较老较硬的种子)可剥离种皮后0.1%升汞灭菌,也可以(较嫩较软的种子)先灭菌后再用器械无菌剥离种皮。

        4、无菌播种

        剥离种皮的种子用无菌水2-3次冲洗后,接种到已制备的MS培养基中,每瓶培养基接种一粒。做好标记,置于培养室光下培养,以后一周随时观察生长状况。

        5、清洁整理

        清洁整理工作台和组培室,并将器械等工具清洗整理好以备下次实训使用。

        二、胚轴接种

        (一)实践目的

        在上次实践基础上进一步学习愈伤组织培养的胚轴切割转接技术,加深对愈伤组织的理解。

        (二)实践地点和时间

        植物组培室、建议4学时

        (三)实践用具与材料

        超净工作台、手术剪、枪状镊、解剖刀或刀片、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、记号笔。无菌播种已萌发青豆、无菌播种已萌发豌豆、大量元素、微量元素、维生素、铁盐、BA、2,4—D等母液。

        (四)实践步骤

        1、制备培养基

        为试验观察生长物质对愈伤组织的影响,加深理解,可做对比试验,制备三种培养基

        配方1 MS+0.1ml/LBA+0.5ml/L2.4—D

        配方2 MS+0.5ml/LBA+0.1ml/L2.4—D

        配方3 MS+0.5ml/LBA+0.5ml/L2.4—D

        2、下胚轴的切割转接

        (1)进行超净工作台开启紫外灯、风机,换鞋、穿工作服、清洁双手等常规操作。检查酒精灯、酒精瓶是否该加酒精。

        (2)将上周无菌播种成活,已经萌芽的种子放入超净工作台,仔细观察种子,把污染的淘汰掉。

        (3)灼烧镊子和解剖刀刀片,冷却,注意不能伤手。

        (4)用工具将萌发种子放入培养皿内滤纸上,看清楚的胚轴位置,用镊子和解剖刀刀片等器械除去子叶和胚根,切割胚轴成5mm左右切段。

        (5)将切割下来的胚轴移入新培养基内,做好标记,三种配方分别移入标记,放入培养室培养。

        3、清洁整理

        按常规清洁整理超净工作台和实验室,注意超净工作台不能用酒精擦拭,地面可用洗衣粉拖地,接种室可进行甲醛加高锰酸钾熏蒸,为以后的实验作准备。

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