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        诱导多能干细胞iPSC培养基质如何转换注意事项

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        滋养层细胞在胚胎干细胞 的培养中扮演了双重角色,同时提供了生长底物和生长因子。后者我们能用外源的生长因子来替代。至于前者,一些研究人员也开始用基底膜基质来替代,如BD的Matrigel。当然,人类胚胎干细胞及诱导多能干细胞(iPSC)的最佳培养条件是成分完全明确,并且完全人源性的。

        为此,StemCell Technologies公司就推出了StemAdhere™ Defined Matrix,该产品含有一种人源重组 蛋白,可用于人类多能干细胞的长期培养。StemCell 公司推荐使用该基质胶作为Matrigel的替代品,虽然其价格会比Matrigel贵30%-40%,但它成分明确,并且可与TeSR™2培养基共同使用,带来一个完全确定、无动物蛋白、不依赖滋养层的培养系统。

        当然,从Matrigel转换到StemAdhere,iPSC需要一个适应过程,StemCell 公司也开发出一个优化步骤,便于培养的转换。据专家介绍,iPSC最初会经历一个“适应期”,正如之前从滋养层细胞到无滋养层条件的转换。在刚刚转换到StemAdhere 时,iPSC培养物的粘附和扩增速率都低于预期。在2-4代后,生长和铺板效率通常会改善,并达到之前的水平。详细步骤请点击此处查看。

        StemCell 的专家还给出了5条建议,让您优化从Matrigel到StemAdhere的培养转换。

        1.在传代StemAdhere上培养的iPSC细胞时,使用Gentle Cell Dissociation Buffer,而不是dispase解离酶。

        2.使用非组织培养处理的培养板,因为StemAdhere蛋白不能很好地粘附在组织培养处理的塑料制品上。

        3.在传代前仔细检查您的培养物,排除分化区域。

        4.在最初的转换步骤中,以1:1的比例分割细胞,以确保高水平的粘附。

        5.在后续传代时,分割比例可更高一些,以维持最佳的细胞密度。

        专家还特别提醒,因基质组分的差异,iPSC在适应StemAdhere时,形态上会有轻微的改变。这是很正常的,StemAdhere上的克隆将继续表达高水平的多能性标志物,维持正常的核型,并保留了在畸胎瘤实验中产生三个胚层的能力。

        Stemcell公司的产品包括:检测造血干细胞功能的半固体培养基MethoCult®和MyeloCult®系列,培养和鉴定间充质干细胞的MesenCult®系列,培养和分析神经干细胞的NeuroCult®系列,培养胚胎干细胞和多能干细胞的Es-Cult®系列产品,可以分选各种细胞的免疫磁性分选系统EasySep®,全自动细胞分选仪RoboSep®,全自动克隆挑选系统EasyPick®,及与其配套使用的ClonaCell®-HY试剂等等。

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