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        常用酶的配制之蛋白水解酶类的配制

        互联网

        4026

        蛋白水解酶类的配置

         

         

          贮存液 贮存温度 反应浓度 反应缓冲液 温度 预处理
          0.01mol/L Tris(pH7.8)  
        链霉蛋白酶a 20mg/ml -20℃(溶于水) 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃ 自消化b
          0.5% SDS  
          0.01mol/L Tris(pH7.8)  
        蛋白酶Kc 20mg/ml -20℃(溶于水) 50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37~56℃ 无须预处理
          0.5% SDS  

          a:链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

          b:自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。

          c:蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA(以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。

        (责任编辑:大汉昆仑王)
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