DNA重组与基因工程 小结

 

基因工程又称遗传工程，是生物工程的主导技术。DNA重组技术或分子克隆是基因工程的核心。分子生物学研究中发现的许多核酸酶类都可用作基因工程的工具。其中能识别特定的回文序列并切割DNA双链的Ⅱ类限制性核酸内切酶在DNA重组技术中被广泛应用。

　　当前目的基因序列主要来源于自然界的生物，无性繁殖的纯基因称为基因克隆，目的基因或核酸序列必须由 载体 携带进入宿主细胞复制繁殖才能分离到克隆。常用的 载体 有质粒、噬菌体、病毒、 酵母 人工染色体等， 载体 必须能携带目的序列有效地进入宿主细胞复制繁殖，并应当具有良好的标志可供识别和筛选，常用有抗药性和α互补蓝白筛选标志等。为获得目的基因克隆，可构建生物的 基因组 文库，完整的基因组文库是含有该生物全部遗传信息的克隆集合体，从基因组文库中可以克隆得该生物的基因组基因；以mRNA为模板经反转录酶催化合成与NRA序列互补的DNA称为cDNA，可以从组织细胞提取mRNA构建cDNA文库，完整的cDNA文库可以获得特定基因的cDNA构隆。目的基因也可以用PCR或人工合成核酸的方法得到，但还离不开从生物基因组和cDNA获得基因序列知识。要设计严密的方案，借助工具酶的作用，将目的基因或序列以适当的连接方式插放载体，用转化、感染或转染的方法导入宿主细胞繁殖，经抗药生长、呈色显示，核酸分子杂交、PCR、免疫学亲和结合或限制性酶谱分析等方法筛选获得克隆，最后要经过核酸序列分析鉴定。

克隆的基因可以插入表达载体中带有宿主细胞中表达，这是研究目的基因功能和获取基因产物必需步骤。表达载体应当具备在宿主细胞中复制繁殖、筛选、目的基因插入、以及基因表达所需要的各种元件。大肠杆菌遗传背景清楚、操作容易、经济、表达水平高，是最常用的表达系统，但它不适用于真核基因组基因的表达并缺乏真核转录后加工、翻译后加工等功能。

DNA重组技术和基因工程是分子生物学发展的突出领域，开创了人类能动改造生物界的新阶段，推动了医学和整个生命科学的进步，为基因诊断、基因治疗、基因工程药物的发展开辟了道路，是分子生物学走向广泛应用的重要方面，目前基因工程还只是发展的初阶段，它将依赖于分子生物学的进步而发展。