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        各种组织特殊染色法—弹性纤维染色

        互联网

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        弹性纤维主要由弹性蛋白(一种黄色硬蛋白,它是黄色弹性纤维组织的主要成分,干燥时易脆,而湿润时呈弯曲并富弹性)构成。它广泛分布于全身的各个部位,尤以循环系统,呼吸系统和皮肤系统为甚。新鲜时它呈黄色,固又称为黄色纤维。弹性纤维较细,直径0.2-1.0um,有分支,不成束。但可交织成网。它富有弹性,容易拉长,但不能拉到超过它的极限,外力除去后又恢复原状。弹性纤维与胶原纤维交织在一起,在HE染色的标本上,含量少时不易与胶原纤维区别,含量多时呈折光性强的淡粉红色。由弹性蛋白构成弹性纤维的鞘,并非完全的密封,在其周围有许多微细孔,这些微细孔可作为营养物及排除废物的场所。
        弹性纤维主要来源于带有平滑肌特征的间胚叶细胞,少量可由脉管的内皮细胞产生,先形成前——弹性蛋白(pro-elastin),这时在电镜下可见到直径为200nm的电子密度微纤维,在成熟的弹性纤维蛋白,电密度减少或丧失,较为均匀一致。
        弹性纤维与胶原纤维,网状纤维不同,它极难容于有机或无机的溶液里。
        (一)弹性纤维的变形和病理变化
        随着年龄的增长,特别是到了老年的时候,弹性纤维可发生生理性的变化,这时可观察到弹性纤维的纵行分裂,断成碎片,最后成为颗粒,这些变化同时也伴有化学变化,氨基酸和钙的含量有所增加,这些变化在皮肤是最明显的。当有病变的时候,我们便可在切片观察到有的弹性纤维增生,有的被破坏,断裂、崩解,失去弹性。如主动脉瘤,就可见到瘤壁上的弹性纤维已经失去了弹性。这是由于主动脉壁的弹性纤维受到内压的不断冲击,弹性纤维过度牵拉,超过它的极期,再也恢复不了原状,因此在切片标本上(特殊染色)只能见到其痕迹或反应物。
        (二)弹性纤维的染色方法
        1.Weigert氏雷锁辛品红法(1898)(Weigerts resorcin-fuchsin method) 试剂 的配制:
        Wergert氏雷锁辛品红液:
        碱性品红 2g
        雷锁辛 4g
        蒸馏水 200ml
        30%三氯化铁 25ml
        取500ml的烧瓶加入蒸馏水和雷锁辛,用玻棒搅拌均匀,加热直至沸腾,持续1-2min,再加入30%的三氯化铁水溶液继续搅拌直至煮沸2-3min后,此时溶液的颜色变为紫罗蓝色,冷却后过滤。倒去滤液,将滤纸和沉淀物一起放入烤箱中一起烤干。取200ml95%酒精,将滤纸与沉淀物一起放入加热溶解,除去滤纸,冷却后过滤,用95%酒精凑足200ml,再加入4mlHCL。即可使用,保存于4℃冰箱,可长期使用。
        操作方法:
        ⑴切片脱蜡至水,
        ⑵0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min,
        ⑶水洗,
        ⑷2%草酸漂白1-2min,
        ⑸水洗,
        ⑹入95%酒精,
        ⑺入Weigert氏雷锁辛液,室温染1-2h,
        ⑻95%酒精分化至背景清晰为止,
        ⑼Van Giesson氏液或核固红作对比染色,
        ⑽脱水透明,封固。
        结果:弹性纤维:深蓝或深黑色,其余成分视用何种对比染色而定。
        该法特点:
        ①可将微细弹性纤维显示出来。
        ②方法可靠,颜色鲜红色,切片可保存。
        ③配制好的染液可使用较长时间。
        注意事项:
        ①1908年H art应用该法,将1%HCl酒精稀释了Weigert氏原液。即原液5-20ml。酸酒精30-40ml。结果弹性纤维显示蓝色——黑色。
        ②1929年French改良了这种方法,用Weigert氏原液中的2g品红,改为1g结晶紫。结果弹性纤维显示深蓝——绿色。
        ③1929年Sheridan改良了该法,Weigert氏原液中的2g品红改用为2g结晶紫。结果弹性纤维显示为绿色。
        ④在溶化沉淀物时,应隔水溶化,不要直接于明火上加热熔解。
        ⑤配制后的染液用小磨口瓶装,以防溶液挥发,影响染色效果。
        ⑥该溶液虽可保存较长时间,但仍以新鲜配制为好。
        ⑦切片在透明时,有人提出切片不要经过苯酚二甲苯。其原因之一是对已染色的切片有影响。

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