病原性球菌检查（二）

实验目的
1掌握病原性球菌培养物性状。
2掌握血浆凝固酶试验原理方法。
3掌握密集接种法，熟悉药物（如抗生素）抑菌杀菌原理并了解纸片法、试管法的试验方法及应用。
实验材料
1、菌种：金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌6~8小时肉汤培养物。
2、培养基：普通琼脂平板、肉汤培养基。
3、药品：青霉素溶液（50u/ml）、抗生素滤纸片。
4、器具：恒温箱、接种环、酒精灯、试管、无菌棉拭、无菌小镊子、无菌吸管、玻片、血浆。
实验内容
一、病原性球菌的培养物观察
肉眼观察葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌在血琼脂平板上的生长情况及脑膜炎球菌在巧克力（色）琼脂平板上的生长情况，比较菌落的形态特征。
（1）葡萄球菌：在血琼脂平板上培养18~24小时，形成圆表凸起，表面光滑、湿润、边缘整齐，菌落不透明。金黄色葡萄球菌金黄色，可产生透明溶血环；表皮葡萄球菌白色、无溶血环，腐生葡萄球菌白色或柠檬色，无溶血环。
（2）链球菌：在血琼脂平板上培养18~24小时，形成灰白色、圆形凸起、半透明或不透明的细小菌落。甲型溶血性链球菌不完全溶血，在菌落周围形成草绿色溶血环，乙型溶血性链球菌完全溶血、形成透明溶血环，丙型链球菌不发生形成圆形、光滑隆起透明似露珠的菌落。在血琼脂平板上不发生溶血溶血、无溶血环。
（3）肺炎球菌：血琼脂平板上培养18~24小时，形成细小、灰白色、扁平、半透明的菌落，周围有草绿色溶血环，其与甲型溶血性链球菌相似，培养2~3天后，因菌体发生自溶，菌落中央下陷呈“脐状”。
（4）脑膜炎球菌：在巧克力（色）琼脂平板上加5%CO237℃培养24小时，
形成圆形光滑隆起透明似露珠的菌落，无溶血环。
二、血浆凝固酶试验
1、原理
致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使人或动物血浆发生凝固，因此，测定血浆凝固酶的有无是鉴定葡萄球菌致病性的重要依据。
2、方法及结果
（1） 玻片法：
①取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，其中一格加2接种环的生理盐水，另一格加1：2人血浆（或免血浆）1接种环。
②用接种环取上次培养物葡萄球菌之菌落少许在生理盐水内研磨成细菌悬液，然后取此悬液1环与血浆混匀。
③5分钟以内观察结果，若有凝块出现，即为阳性；若无凝块出现，则为阴性。
（2） 试管法：
①按表24-1加入1：4血浆及葡萄球菌肉汤培养液。
②将各管置37℃水浴中，每隔30分钟观察一次结果。
③在3小时内，若第一管及第二管出现凝固，而第三管不出现凝固则为阳性。
表24-1 血浆凝固酶试验（试管法）